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背景和目的：妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)易导致胎儿急性宫内窘迫甚至突然死亡,其病理生理机制不明,常规的产前监测无法预测。故进一步研究ICP病理生理机制,认识ICP导致胎儿死亡的原因,是预防ICP不良妊娠结局的关键。我们的前期研究发现ICP死胎的胎盘小血管中存在血栓及再通形成的现象,故提出假说：ICP孕母血液中升高的胆酸引起了胎盘血管内皮细胞功能障碍,促使血栓形成,微循环障碍,严重影响母胎氧气和营养物质交换,引起胎儿急性宫内窘迫甚至发生胎儿死亡。即ICP死胎的发生可能与胆酸引起的胎盘血管内皮细胞功能障碍有关。为验证上述假说,我们进行以下实验：①观察ICP胎盘组织学及超微结构的变化；②免疫组织化学法检测ICP与正常胎盘自噬相关蛋白LC3A/B与血栓形成相关蛋白vWF的表达；③利用体外细胞模型观察胆酸对人血管内皮细胞的影响。材料与方法：1.体内试验：①ICP胎盘组织学观察：收集1999年1月-2012年12月浙江大学医学院附属妇产科医院病理科收藏的有完整临床资料的ICP死胎的胎盘的档案蜡块13例,设为ICP死胎组。选择浙江大学医学院附属妇产科医院活胎分娩的孕妇共40例,其中ICP胎儿活产孕妇20例(ICP活胎组),健康孕妇正常分娩20例为正常妊娠组。光学显微镜下观察各组胎盘组织石蜡切片的HE染色玻片,统计各组胎盘梗死、合体结节细胞增多、绒毛干血管血栓形成及再通发生的比例。②ICP胎盘超微结构观察：应用透射电镜扫描观察ICP活胎组与正常妊娠组人胎盘组织中血管内皮细胞的超微结构改变。③免疫组织化学法研究：根据前期结果,通过免疫组化法检测ICP与正常胎盘自噬相关蛋白LC3A/B与血栓形成相关蛋白vWF的表达。2.细胞模型研究①用不同浓度梯度(0～100uM)的甘胆酸处理人血管内皮细胞株(HUVEC)24小时。②透射电镜扫描观察甘胆酸处理的HUVEC超微结构的变化。③通过蛋白免疫印迹方法检测HUVEC自噬相关蛋白LC3Ⅱ与beclin-1的表达量。结果：1.ICP胎盘组织学变化：①正常妊娠组2例有局灶性合体细胞结节增多,未见到梗死、底蜕膜血肿及血栓形成。②ICP活胎组20例胎盘病理检查,其中10例有局灶性合体细胞结节增多,7例有梗死,4例见到底蜕膜血肿,1例见到绒毛膜下血栓。③ICP死胎组13例胎盘病理检查均有局灶性合体细胞结节增多,其中5例可见梗死伴有小区钙化、绒毛退行性变,5例远端绒毛干血管中可见血栓形成及再通。2.ICP胎盘组织血管内皮细胞超微结构变化：正常组胎盘组织中血管内皮细胞内可见W-P小体与大量弹力纤维；ICP活胎组胎盘组织中血管内皮细胞内亦可见到W-P小体与大量弹力纤维,同时可见到自噬小体明显增多,并有向血管腔内分泌的趋势。3.ICP胎盘自噬相关蛋白LC3A/B与血栓形成相关蛋白vWF的变化(1)LC3蛋白主要表达于胎盘血管内皮细胞、血管壁平滑肌细胞及胎盘滋养细胞的胞浆。正常妊娠组胎盘血管内皮细胞表达较弱或者不表达。与正常妊娠组比较,ICP活胎组、ICP死胎组胎盘组织的血管内皮细胞中,LC3蛋白表达递次增加,三组间的比较差异有统计学意义(P<0.001)。(2)vWF因子主要表达于胎盘血管内皮细胞的胞浆,正常妊娠组胎盘血管内皮细胞表达较弱。与正常妊娠组比较,ICP活胎组、ICP死胎组胎盘组织中vWF因子表达明显增加,三组间的比较差异有统计学意义(P<0.001)。ICP死胎组可见绒毛干的血管中,VWF因子在血栓形成并再通的血管内皮细胞上强表达。(3)胎盘血管内皮细胞LC3A/B与VWF的表达呈正相关(r=0.65,P<0.001)。4.甘胆酸对HUVEC超微结构的影响：用100uM甘胆酸与HUVEC细胞共培养24小时,透射电镜扫描观察到HUEVC细胞内自噬小体较对照组明显增多。5.甘胆酸对HUVEC细胞LC3B-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达的影响。不同浓度(0～100uM)的甘胆酸作用24小时后,HUVEC的LC3B-Ⅱ、Beclin-1表达量随甘胆酸浓度的增加而逐渐增加。其中100uM组LC3B-Ⅱ的表达量显著高于对照组(P<0.01)。结论：1.ICP死胎组胎盘血管存在血栓及再通现象,提示血栓形成可能是ICP胎儿窘迫甚至死胎发生时胎盘重要的病理变化之一。2.ICP胎盘血管内皮细胞自噬增加,体外细胞模型研究证实甘胆酸可诱导血管内皮细胞自噬增加,提示自噬增加是ICP重要的病理生理机制之一,可能与胎盘血栓形成、胎儿窘迫、死胎发生有关。