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非洲菊是极具市场前景的世界四大切花之一,也是研究复杂花序的理想模式植物。GASA基因家族成员参与了植物生长发育各个方面的调控。目前在非洲菊中报道的GASAs家族成员只有2个。本论文在已克隆得到5个非洲菊GASA(GEG、PRGL、GEG2、GEG3、GEG4)家族成员的基础上,通过进一步分析它们的表达模式和初步研究功能,旨在揭示GhGASAs基因在非洲菊生长发育过程中的作用机制。研究主要取得了以下结果: 1、构建了非洲菊活体机械损伤模型。实验结果表明,花梗损伤一侧舌状花瓣生长受抑制,导致花序畸形。在花瓣生长抑制的过程中,GEG的表达在第1、5天下调明显,PRGL的表达在受损后第1天上升,但第2、3天下降。这两个基因可能与损伤引起的花瓣生长抑制相关。 2、优化了花序离体培养系统。在仅含有dH2O培养下,几乎所有GhGASAs和EXP、XET基因都表达很低,与生长停止的现象一致。而在加有3%蔗糖的条件下,EXP和XET表达水平随着花瓣的生长而升高。GEG和PRGL以及GEG4表达与活体中的表达趋势一致。GEG2基因的表达模式与花瓣长度的相对增加率一致。实验说明GhGASAs和EXP、XET表达与花瓣生长相关。 3、分析了GEG-RNAi非洲菊植株的表型与基因表达水平。实验结果表明,GEG-RNAi非洲菊中的GEG基因沉默成功。RNAi植株舌状花瓣显著变长、变宽。但组培苗外施GA3后,GEG-RNAi叶片数目明显比对照少,说明对GA的敏感性下降,暗示GEG在发育不同阶段可能具有不同功能。 4、制备了GhGASAs的多克隆抗体。对Anti-PRGL2、Anti-GEG3-1、Anti-GEG3-2、Anti-GEGC、Anti-GEGN等5个抗体的特异性进行了检测。GEG能被Licl提取,在S6期花瓣中含量高;PRGL蛋白在S2和S6期花瓣中都能检测到表达,添加SDS、DTT和Urea有助于PRGL蛋白的提取。 以上研究结果表明,GhGASAs对非洲菊的生长发育具有调控作用,其中GEG和PRGL的作用比较明显。各家族成员在不同发育时期的精细调控作用还需进一步开展研究。