论文部分内容阅读
目的:利用功能学、形态学和分子生物学等检测方法，研究蒙药古日古木-13对光损伤小鼠视网膜细胞组织结构及功能的影响，评价其抑制细胞凋亡的能力。明确蒙药古日古木-13对小鼠视网膜光损伤的保护作用。 方法:1、动物选择:取鼠龄7～8w的SPF级雄性C-57小鼠40只，体重18～22g。2、实验分组和给药:将实验动物随机分为五组:正常组（8只），对照组（8只）和治疗组(24只)。治疗组:将小鼠随机分为三组（古日古木-13低、中、高剂量组），每组8只，进行1.6g/kg/d、0.8g/kg/d和0.4g/kg/d剂量的古日古木-13灌胃。所有小鼠光进行1天暗适应后，在试验用光损伤箱中进行冷照射（照射强度:9000Lux;照射时间:12h;室温:24℃;湿度:40～65％;未限制进食及饮水。）照射结束后送返至暗环境12h，光照后灌胃给药7天。对照组:除灌胃给予相同体积生理盐水外，光照方法与治疗组相同。3、眼电生理检查:使用视网膜电图(ERG)评析视觉系统评估各组小鼠视网膜功能变化。4、视网膜组织结构变化:深度麻醉小鼠后摘取眼球，将左眼球置于多聚甲醛中固定1h。OCT包埋冷冻后进行切片、HE染色，在光镜下观察各组视网膜组织结构的改变及外核层厚度变化。5、western blot检测:检测各组小鼠右眼凋亡蛋白caspase3/8/9、Bax/Bcl-2表达量:评估各组细胞的凋亡程度，判断古日古木-13是否对视网膜细胞凋亡有抑制作用。 结果:1、电生理(ERG)检测结果显示:治疗组ERG波形振幅数值显著大于光照组数值，差异有统计学意义(p＜0.001)，正常组ERG波形振幅数值数值明显大于治疗组数值，差异有统计学意义(p＜0.05)。2、镜检结果显示:正常组小鼠视网膜细胞形态良好，排列整齐，结构层次清晰，外核层细胞排列紧密，大小均匀。光照组小鼠视网膜细胞形态排列紊乱，组织结构界限模糊不清，外核层细胞排列疏松，大小不一，可见空泡化及细胞水肿。治疗组小鼠视网膜细胞排列不整齐，纤维间质部分水肿，偶见空泡。细胞形态大致正常。小鼠视网膜外核层厚度显示:光照组视网膜外核层厚度与正常组相比明显减小，而治疗组较光照组视网膜外核层厚度稍有增大(p＜0.05)，差异具有统计学意义。3、Western blot检测结果显示:光照后治疗（高、中、低剂量）组与对照组相比，Caspase3、8、9、Bax蛋白表达量低于对照组，Bcl-2蛋白表达量高于对照组，差异具有统计学意义(p＜0.05）。 结论:1、蒙药古日古木-13对光损伤小鼠视网膜组织结构及功能具有保护作用。2、蒙药古日古木-13对光损伤小鼠视网膜细胞凋亡具有抑制作用。