【摘 要】
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龟裂链霉菌MY02(Streptomyces rimosus MY02)是一株从东北地区蔬菜保护地土壤中筛选分离到的放线菌。该菌株的发酵液具有部分抑制革兰氏阳性细菌(G+)、革兰氏阴性细菌(G-)及广谱抗真菌活性。MY02产生的抗真菌活性化合物——龟裂霉素(Rimocidin)是一种多烯类抗生素,在医药和农业上有重要的应用。本论文旨在通过构建共培养体系,提高龟裂链霉菌MY02 Rimocidin产
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龟裂链霉菌MY02(Streptomyces rimosus MY02)是一株从东北地区蔬菜保护地土壤中筛选分离到的放线菌。该菌株的发酵液具有部分抑制革兰氏阳性细菌(G+)、革兰氏阴性细菌(G-)及广谱抗真菌活性。MY02产生的抗真菌活性化合物——龟裂霉素(Rimocidin)是一种多烯类抗生素,在医药和农业上有重要的应用。本论文旨在通过构建共培养体系,提高龟裂链霉菌MY02 Rimocidin产量,初步探索该共培养体系的诱导机制,分析共培养对MY02其他诱导特性的影响,以及诱导菌株对其他链霉菌活性的影响。本研究中使用了实验室中保藏的70株微生物菌株作为诱导菌株,包括52株细菌,6株放线菌,12株真菌。构建了 70组MY02与诱导菌株的共培养体系。共培养结束后,评价Rimocidin产量,计算各诱导菌株诱导率。筛选得到对链霉菌MY02特性影响较大菌株:真菌诱导菌株3.4261以及细菌诱导菌株1.0941。探究真菌菌丝生长速率与诱导之间、真菌3.4261发酵液pH与链霉菌MY02 Rimocidin产量之间的相关性。优化了活体真菌诱导菌株3.4261诱导链霉菌MY02在液体摇瓶中高产Rimocidin的条件。最佳诱导条件为:诱导菌株接种时间是链霉菌MY02发酵36h,诱导菌株接种量2%,诱导菌株菌龄4d。与链霉菌MY02单独培养相比,真菌诱导菌株3.4261与MY02共培养后Rimocidin产量提高了 70%。探究菌株3.4261的诱导机制,结果表明,真菌3.4261的有效诱导成分存在于发酵液中,进一步分析真菌诱导菌株3.4261发酵液发现,发酵液乙醇沉淀上清液的去乙酸乙酯水相有显著的诱导作用,优化了有效诱导子的添加时间及添加量分别为 24 h 和 10-20%。此外,本研究还对细菌诱导菌株1.0941与链霉菌MY02在共培养体系中分泌的一种红色水溶性色素进行了分析。紫外可见吸收光谱、液质联用和核磁共振分析结果表明:该色素吸收波长为558 nm,分子量约为588,红外光谱表明其分子结构中含有氨基和羧基,核磁共振波谱表明这种红色素结构中含有苯环。本研究选用在前期筛选得到的诱导率相对较大的3株诱导菌株与其他链霉菌构建共培养体系。结果表明,不同链霉菌的最优诱导菌株不同,同种诱导菌株对不同链霉菌的诱导活性不同。本研究证实了共培养能够提高链霉菌抑菌活性,为共培养诱导机制的探究提供了另一试验基础,也为共培养代谢产生新型次级代谢产物奠定了理论依据,为共培养的实际应用扩大化提供指导意义。
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