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本文以我国珍稀药用植物海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)为研究材料,从海南省热带植物园、尖峰岭自然保护区、霸王岭自然保护区海南粗榧树皮、树叶和树皮中分离得到的内生真菌以其中分离得到183株内生真菌进行抗菌和抗肿瘤活性筛选,以期找到高效活性物质,为开发天然的、新的药用物质提供理论依据。首先进行抗菌活性筛选,再对高抗菌活性菌株进行抗肿瘤活性筛选,然后对高抗癌菌株进行代谢产物的分离纯化及结构鉴定,最后对单体化合物进行抗癌活性验证。以3株细菌(大肠杆菌Escherichia coli ATCC25922、金黄色葡萄球菌Staphylococcu aureus ATCC51650和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ATCC6633)、4株植物病原真菌(水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani ZLL101、油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum XJS01、香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp. cubense RKY102和镰刀菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense FJAT-370)以及1株罗非鱼源病原菌(无乳链球菌Streptococcus agalactiae HYXY08)共8株为测试菌株,对183株海南粗榧内生真菌进行抗菌活性筛选,初筛选出27株活性菌株,再进一步进行代谢产物复筛,共筛选出11株高抗菌活性菌株。采用传统真菌形态学鉴定和18SrDNA-ITS序列分析相结合的方法对该11株内生真菌进行鉴定,结果如下：Al:Phomopsis destruens, A9:Penicillium citrinum, A21:Diaporthe vexans, A31:Penicillium soppii, B6:Nemania diffusa, B14:Diaporthe actinidiae, B21:Corynespora cassiicola, C7a:Phomopsis phyllanthicola, E2:Leptostroma sp., F52:Neonectria macroconidialis, F127: Phomopsis eucommicola。接着,对该11株高抗菌活性内生真菌的代谢产物进行提取,以白血病细胞株K562、 NB4、 HL-60和肝癌细胞株HepG-2、结肠癌细胞株LoVo等5株细胞为抗癌测试对象,对内生真菌粗提物进行抗肿瘤活性筛选,发现每株内生菌都至少对一株肿瘤细胞有抑制效果。其中,有9株内生菌对2株以上肿瘤细胞有抑制作用,特别是属于杜仲拟茎点霉(P. eucommicola)的F127对3株白血病细胞的ICso值都在32μg/mL以下,其中对K562和NB4都显示出了极强的抗肿瘤活性,ICso值分别为8.07μg/mL和16.68μg/mL。因此对菌株F127进行进一步深入研究。将F127进行发酵罐扩大培养,对发酵液用乙酸乙酯提取,得到其代谢产物粗品15.6g。运用硅胶柱层析、薄层层析以及重结晶等方法对提取物粗品进行分离纯化,以LC-MS、 ES-MS和超导核磁共振分析,最终得到5个单体化合物,并确定了它们的结构：化合物1为oblongolides T,化合物2为sorbicillin ((2E,4E)-1-(2,4-dihydroxy-3,5-dimethylpheny1)-,2,4-Hexadien-1-one),化合物3为邻苯二甲酸二丁酯,化合物4为Phomopsolide B,化合物5为6,8-dihydroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin。最后,对该5个化合物测试其对5株肿瘤细胞的抑制作用。结果显示5个化合物中有3个化合物显示有抗肿瘤活性,化合物2和3未显示抗肿瘤活性。化合物1对3株白血病细胞K562、NB4和HL-60都具有较好的抑制活性,IC50值分别为51.82、54.25和29.31μg/mL;化合物4对5种肿瘤细胞株都显示有抑制作用,对肝癌细胞HepG-2和结肠癌细胞LOVO的抑制作用比较温和,IC50值分别为92.94和87.34μg/mL,但却对白血病细胞K562、NB4和HL-60的抑制效果非常强、IC50值分别为3.35、0.014和0.16μg/mL;化合物5对白血病细胞(NB4)和肝癌细胞(HepG-2)也有一定的抑制活性,IC50值分别为87.08和96.57后续值得对化合物1和4的抗癌活性进行进一步深入研究。海南粗榧的重要药用价值是其对白血病的抑制和治疗作用,本文成功筛选到一株高活性抗菌、抗肿瘤的内生真菌,并且从中分离、获取了具有抗癌活性的单体化合物,特别是获取了对3株白血病细胞K562、NB4和HL-60抑制效果都非常强的化合物。本文的研究为从海南粗榧的内生真菌中寻找高活性、强抗癌的天然药物奠定了理论基础。