糖尿病血管并发症是糖尿病患者致死的主要原因之一，而内皮细胞损伤则是血管并发症的基础，本文利用体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）为靶细胞，以高糖（HG）、高胰岛素（HI）、高胰岛素原（HPI）及肿瘤坏死因子（TNFα）为致病刺激物。从细胞、蛋白分子及mRNA水平探讨了糖尿病血管内皮细胞（VEC）损伤和粘附功能改变的细胞、分子机制，以期为临床防治糖尿病血管并发症提供理论依据。 一、内皮细胞表面整合素-α_vβ₃表达改变 （一） 内皮细胞膜α_vβ₃蛋白水平表达改变： 利用酶联免疫吸附、荧光免疫组化及抗体-核DNA双荧光标记等方法检测经HG、HI等刺激后HUVEC表面粘附性受体-整合素α_vβ₃ （Integrin β₃亚族成员）表达的改变，发现HG、HPI、HI及TNFα在一定的浓度和时间内均可使HUVEC膜表面α_vβ₃表达呈时间和浓度依赖性增加，而超过一定浓度和时间则表达减少，同时伴有细胞不同程度的损伤。 荧光免疫组化证实，经上述刺激物作用后，人为使EC悬浮，则可见EC表面α_vβ₃的表达与贴壁培养细胞相比明显增加，推测可能是细胞脱落悬浮后，细胞表面α_vβ₃发生重新分布或暴露增加。用荧光免疫组化-碘化丙啶双染色方法，同时检测膜表面受体表达和胞核DNA的改变，发现HG和HPI组在细胞表面α_vβ₃表达上调的同时，核DNA的荧光着色也加深，提示核DNA量和膜表面该受体蛋白表达增加有一定的相关性。 （二） EC的α_vβ₃ mRNA水平表达改变： 采用Nothern-blot、荧光原位杂交（Fluorescent in situ hybridization，FISH）等方法，检测经各种刺激物激活的HUVEC中α_vβ₃的mRNA表达变化，从分子水平探索EC功能改变的机理。 Northern-blot杂交后经放射自显影密度扫描证明，HG、TNFα、HI及HPI分别刺激HUVEC 72h后，α_v亚单位和β₃亚单位的mRNA水平均明显高于对照组。其中HG和HPI的作用最明显。FISH的结果与Northern-blot一致。HUVEC与刺激物共同孵育72h