游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:dolan525
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本论文通过4个试验进行游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究。试验一不同浓度梯度游离棉酚对小白鼠体重和泌尿系统的影响研究。随机选取90只24.69±1.01g雄性昆明小白鼠,随机分为5组,O mg/kg”*d,40 mg,,kg‰*d,80 mg/kg‰*d,120 mg,,kg*d,160 mg/kg”利。预试期7d,正试期6周。观察试验过程中小鼠体质状况,称重,分别在第2周和第6周,采集各组小鼠。肾脏进行HE染色切片镜检。结果表明:饲喂棉酚3周内对小鼠体重增长的影响较小,后期对小鼠生长具有抑制作用;饲喂棉酚会引起小鼠肾脏出现肾间质出血、肾梗死、。肾颗粒变性坏死、肾小球毛细血管扩张,充血,出血等组织损伤。试验二棉酚对小白鼠血清中钾镁钙磷的影响研究。在试验第2周和第6周,采集各组小鼠血液,用全自动生化分析仪检测血清中钾、镁、钙、磷的含量。结果显示,40-120mg/kg”*d的棉酚浓度饲喂雄性昆明小白鼠,会引起小白鼠低血钾,在该棉酚浓度范围内,对各组小鼠血清中钙、镁、磷的含量影响差异不显著。试验三小白鼠肾小管上皮细胞原代分离培养方法的建立。用胶原酶Ⅳ和胰蛋白酶消化法,从幼鼠和成年鼠分离培养昆明小白鼠原代。肾小管上皮细胞,用一抗为1:400cyt。teratin 18,二抗为l:100的山羊抗小鼠的抗体对其进行特异性鉴定,结果表明:成年鼠肾脏分离效果比幼鼠好;消化10min得到的细胞产量较多;胶原酶Ⅳ消化效果较好,比胰蛋白酶消化法分离的细胞贴壁早,且贴壁数量多;肾小管上皮细胞鉴定结果为阳性。试验四棉酚对小白鼠肾小管上皮细胞的影响研究。对肾小管上皮细胞按照添加棉酚浓度分成14个组,分别添加Oug/m1、10001ag/ml、500ug/ml、250ug/ml、125ugml、62.5ug/m1、31.3ug/m1、10001ag/m1的左旋棉酚和消旋棉酚。分别在棉酚接触细胞24h,48h,72h和96h时,用MTT法检测细胞凋亡率,用试剂盒检测培养液中H1]L酶活力,用超微量ATP酶试剂盒测细胞内cMA酶和NKA活力。结果表明:细胞凋亡率与消旋棉酚浓度和作用时间具有明显依从性,即细胞凋亡率随消旋棉酚浓度的升高而增大,随棉酚作用时间延长而增大;左旋棉酚只有在作用48h时,细胞凋亡率与棉酚浓度和作用时间具有明显依从性。LDH泄漏量与棉酚接触。肾小管上皮细胞的时间具有依从性,与棉酚浓度没有依从关系,但各浓度棉酚都会造成不同程度的细胞损伤。细胞内NKA活性与棉酚浓度和作用时间具有相关性,细胞酶NKA活力随棉酚作用时间的延长而变小,随棉酚浓度的减小而增大。左旋棉酚对细胞NKA活力的影响比消旋棉酚大。棉酚对cMA的影响没有时间浓度依从性。结论:小白鼠饲喂游离棉酚,对小白鼠增重具有抑制作用,对小鼠。肾脏组织产生损害作用,并造成小白鼠低血钾。用棉酚接触。肾小管上皮细胞,左旋棉酚和消旋棉酚分别能够使细胞凋亡损伤,导致细胞HDL的泄露,NKA和cMA酶活性的降低,其中左旋棉酚对细胞对细胞NKA活力的影响较大。
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