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氯代芳香烃化合物具有生物毒性、持久性、及环境积累效应,这些化合物通过各种途径进入环境,它们在环境中的长期滞留,对生态环境和人类健康构成了严重威胁。为恢复受这类有毒有害有机物污染水体/土壤的功能,寻求相应的修复补救措施是关键,基于微生物降解作用的生物处理、修复技术因其具有高效、低耗等特性而引起国内外各界人士的极大关注。 众所周知,生物处理、修复系统中微生物种群结构、功能、时空分布与系统处理性能密切相关。随着现代分子生物学技术的发展与应用,特别是PCR-DGGE、FISH等为在基因水平上揭示生物降解系统分子生态特性提供了全新的技术手段。 本文采用PCR-DGGE对EGSB反应器内PCP厌氧降解及污泥颗粒化过程中细菌、古细菌种群结构的时空分布变化特性进行了初步探索,旨在从分子生物学水平上对厌氧降解PCP过程微生物种群结构分子生态特性及其变化状况进行研究。经为期180d的反应器运行实验研究,获得以下结果: (1)从对各时段微生物16S rDNA V3可变区扩增产物的DGGE分析结果来看,在PCP厌氧降解及污泥颗粒化过程中,反应器内细菌和古细菌组成都发生了较明显的变化,带谱的这种变化与反应器运行过程污泥微生物种群演替,特别是PCP脱氯降解菌发育有关。 (2)基于DGGE图谱的相似性分析,随着进水PCP负荷的逐步提升,当反应器稳定运行时,反应器内上下层活性污泥微生物种群结构组成相似,细菌相似性C_s在71.4~77.6之间,古细菌在70.4~76.7之间。 (3)当反应器非正常运行时,反应器上下层微生物种群结构组成即发生变化,细菌相似性C_s降至43.3,古细菌C_s降至35.2。研究结果显示这种变化首先发生在反应器下层,表明反应器下层污泥微生物尤其是产甲烷菌更易受冲击负荷、毒作用等的影响。 (4)为进一步了解微生物种群结构的具体组成,通过回收DGGE条带DNA,重新扩增经纯化的DNA、测序、登陆GeneBank进行序列分析等步骤,结果表明反应器内存在—不可培养细菌与已报道的不可培养脱氯细菌相似性在98%,初步确定该细菌与PCP的脱氯降解相关。浙江大学硕士学位论文 (5)回收古细菌DGGE条带DNA结果显示,反应器内主要古细菌分属甲烷杆菌科(Merhanobacteraceae)、甲烷八叠球菌科(油thanosarcinaeeae)、甲烷粒菌科(Methanoc口rPusulaceae)三个科,厌氧颗粒污泥中的优势产甲烷菌包括油thanosaera eoneslii、Methanorhrix soehngenii和Merhanobacteri、m sp.,这同其他研究者的普遍研究结果相符。