ICU鲍曼不动杆菌流行病学、耐药基因及整合子的研究

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目的:  ⑴了解汕头大学医学院第一附属医院重症医学科(ICU)病人分离的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)的流行病学特点及耐药现状。⑵了解ICU鲍曼不动杆菌所携带的耐药基因以及相关的耐药机制。⑶了解ICU鲍曼不动杆菌 I类整合子与插入序列共同区(Insertion Sequences Common Regions,ISCRs)元件的检出情况以及其二者与抗菌药物及耐药基因的相关性。  方法:  ①运用vitek2 compact全自动细菌鉴定药敏分析系统鉴定本院ICU病人所分离的鲍曼不动杆菌并检测抗菌药物敏感性,运用WHONET软件对耐药率及流行病学数据作统计及分析。②应用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测超广谱β-内酰胺酶基因(ESBLs):blaTEM-1、blaSHV、blaADC;碳青霉烯类耐药基因:blaIMP、blaVIM-2、blaNDM-1、blaOXA23、blaOXA24、blaOXA51、blaOXA58;氨基糖苷类修饰酶基因;aph(3’)-I, aac(6’)-Ib, ant(3”)-I;16s rRNA甲基化酶基因:armA。以及运用肠杆菌科重复序列PCR(Enterbacteriat Repetitive Intergenic Consensus,ERIC-PCR)技术分析95株鲍曼不动杆菌的克隆同源性,并运用卡方检验分析耐药基因与耐药表型间的关系。③运用PCR技术、限制性片段长度多态性-PCR分析(restriction fragment length polymorphism,RFLP-PCR)技术结合DNA测序技术分析鲍曼不动杆菌I类整合子及ISCR1元件的携带率以及其二者可变区所携带的耐药基因,并运用卡方检验分析I类整合子阳性菌株与阴性菌株耐药率的差异。  结果:  ⑴分离出菌株的标本以痰液为主,占95.78%;病人年龄层分布以60岁以上占多数;在2015年内平均每月均有≥3例非重复的鲍曼不动杆菌的检出;除外个别病床外,在2015年内各病床均有至少3例的非重复鲍曼不动杆菌的检出。⑵鲍曼不动杆菌对头孢吡肟和头孢曲松的耐药率分别为93.68%和92.63%;对庆大霉素和妥布霉素的耐药率分别为89.47%和86.32%;环丙沙星的耐药率为95.74%,对左氧氟沙星耐药率为53.19%,其有38.3%的中介比例。对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南的耐药率高达92.63%;替加环素耐药率为41.30%,复方新诺明耐药率为81.05%。⑶blaTEM-1基因的携带率为91.58%,而blaADC基因的检出率为100.00%;所有的菌株均携带有blaOXA51基因(100.00%);检测出共有88株菌携带有blaOXA23基因(92.63%);而blaOXA24、blaOXA58、blaIMP、blaVIM-2和blaNDM-1基因并未在本研究菌株中检出;16s rRNA甲基化酶基因armA的检出率为88.42%;其次为aph(3’)-I基因,携带率为86.32%;ant(3”)-I基因检出率为30.53%;25株鲍曼不动杆菌携带有aac(6)-Ib基因(26.32%)。Ⅱ.耐药基因间相关性:blaOXA23与blaTEM-1、ant(3”)-I与aac(6)-Ib基因间相关性较大。⑷将菌株分为10个克隆型,其中90.52%的菌株为克隆型A,此型为本院ICU内主要的流行克隆型。⑸菌株I类整合子及ISCR1元件携带情况:I类整合子携带率为29.47%;ISCR1元件的携带率为27.37%。⑹可变区耐药基因携带情况:I类整合子可变区基因携带率为100.00%;ISCR1元件可变区未检测出有耐药基因。共扩增出两种长度的可变区,所检测出的耐药性基因组合分别为aacA4-catB8-aadA1以及aacC1-OrfX-OrfX-aadA1。  结论:  ①ICU分离的鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物呈现较高的耐药率。②鲍曼不动杆菌携带 blaTEM-1基因与 blaOXA23基因是导致菌株分别对头孢菌素类抗菌药物耐药以及亚胺培南耐药的主要基因,但不是唯一的决定基因。氨基糖苷类修饰酶基因aph(3’)-I及16s rRNA甲基化酶基因armA分别与菌株对氨基糖苷类药物耐药的相关性较大。基因blaOXA23-blaTEM-1-armA-aph(3’)-I组合是本院鲍曼不动杆菌的主要流行基因组合类型,具有流行播散的优势。③I类整合子及ISCR1元件呈串联形式存在于鲍曼不动杆菌中,增加耐药基因聚集能力以及传播能力,在菌株快速获得耐药性的同时使菌株的耐药机制更加复杂化。④定期对菌株实行耐药性监测以及对耐药基因检测,能有效的指导临床合理运用抗菌药物;医务工作者应增加对手卫生以及院内环境的消毒灭菌的重视程度,避免及预防多重耐药菌株因交叉传播而产生爆发流行。
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