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目的研究HBV基因前S区突变与慢性HBV感染临床进展（肝纤维化、肝硬化）之间的关系，寻找可能有意义的突变位点，进行突变对HBV功能性改变的研究，帮助阐明HBV慢性感染肝纤维化进展的机制。方法⑴横向对比研究：选取慢性HBV感染者469例，其中352例为慢性乙型肝炎（CHB）患者，肝硬化失代偿期（dLC）117人。CHB患者均行肝穿病理检查，纤维化分级（F）0–1有119人，F2–4有233人。提取血清HBVDNA，PCR扩增前S区进行测序比对，寻找与有意义的突变。⑵构建前S2缺失突变株和相应的野生株HBV复制子。选择发生率较高的前S2缺失株（nt16–54）血清样本，构建成pTriEx-preS2缺失株和野生株质粒，转染HepG2细胞，72h后检测细胞中的病毒复制中间体水平评价病毒复制力，检测pgRNA水平评价病毒转录，以及检测上清中的HBsAg、前S2抗原、前S1抗原和HBeAg水平评价病毒蛋白表达。⑶选取6例肝穿患者，进行血清前S扩增、克隆，提取肝组织中HBVcccDNA后进行前S区扩增，并测序比对。结果⑴横向研究提示：①前S基因缺失突变结果：469例患者中，检出前S基因缺失突变者59例（12.6%），其中CHB组34例(9.7%)、dLC组25例(21.4%)，差异有显著统计学意义(P=0.002)。CHB组患者中，F0–1组突变者5例(4.2%)、F2–4组29例(12.4%)，具有显著统计学差异(P=0.013)。②前S2起始密码子突变结果：检出突变者55例(11.7%)，其中CHB组30例(8.5%)、dLC组25例(21.4%)，差异有显著统计学意义(P <0.001)。CHB组患者中，F0–1组突变5例(4.2%)，F2-4组25例(10.7%)，差异有显著统计学意义(P=0.043)。③前S基因点突变分析:共检出常见突变基因位点31个，T2931等突变率在dLC组患者中明显高于CHB患者、基因B型患者中高于C型患者。④多因素分析结果：年龄、基因型、前S基因缺失突变、前S2起始密码子突变，以及T2857、C2931、G2950、C3116、A3120、A109突变等指标是失代偿期肝硬化的独立预测因素；基因型是慢性肝炎重度肝纤维化（F2–4）的独立预测因素。⑵功能学实验表明：pTriEx-preS2缺失株复制子转染的HepG2细胞后上清分泌HBsAg、HBeAg和preS1蛋白的水平与野生株复制子转染的HepaG2细胞相比，差异无统计学意义；上清的HBV DNA载量和细胞内的病毒复制中间体水平略高于野生株，差异无统计学意义；上清分泌preS2蛋白的水平则显著低于野生株，差异有统计学意义。细胞内HBV RNA定量检测显示两者在3.5kbpgRNA、2.4kb mRNA、2.1kb mRNA水平比较差异无明显统计学意义。⑶对6例患者血清HBV前S基因扩增、克隆以及肝组织HBV cccDNA前S基因扩增后测序，显示外周血存在缺失的患者在肝组织中均可检测到。结论随着疾病的进展，HBV前S区缺失频率检出明显增加，前S区缺失可能与慢性HBV感染临床转归（即乙肝肝纤维化）密切相关，前S2缺失株复制子转染HepG2细胞上清前S2抗原水平较野生株复制子转染上清前S2抗原水平显著降低。前S基因缺失可以存在于肝细胞内的HBV cccDNA池中。