抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体研制及其轻链可变区基因克隆、测序

来源 :中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangxue0121
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在该病理室一系列课题"视网膜母细胞瘤的免疫病理及退行性变发生机理的探讨"、"视网网膜母细胞瘤培养细胞分子生物学特性的研究"、"骆驼蓬碱对SO-Rb<50>细胞系裸鼠移植瘤抗瘤作用的研究"、"RB瘤细胞染色体动态分析"等的研究基础上,我们拟采用淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗人RB单克隆抗体;同时,采用RT-PCR方法扩增、克隆抗人RB单克隆抗体可变区基因.为进一步研究RB的发病机制、免疫退变机理及治疗等奠定基础.该文实验用RB实体瘤细胞腹腔注射免疫3只BALB/C小鼠,当其血清滴度大于1:64时,处死小鼠.取其脾脏淋巴细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合.以RB实体瘤细胞,RB<,50>、Raji、Hela、CNE-2、Hep-2及GLC等细胞株有正常淋巴细胞为抗原,用微量免疫荧光法筛选杂交瘤细胞培养上清的特异性.经过3次克隆4次亚克隆,成功地制备了3株分泌抗人RB单克隆抗体的杂交瘤细胞株4A3、3C6、6D4,并对其特性作了初步鉴定.通过NCBI的BLAST分析,发现3C6V<,LcDNA仅与鼠IgVk轻链同源,具有Ig的典型结构特征.
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