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茶树是我国重要的经济作物之一。近年来,已育成许多具有优异性状的茶树品种。一方面,这些品种大多采用系统选种和杂交育种的方法选育而成,骨干亲本类似,亲缘关系比较接近,使品种的遗传背景较窄。如果能从分子水平上揭示这些品种之间的亲缘关系和遗传结构,将为杂交育种时亲本的选择提供一定的科学指导。另一方面,随着,新培育出的优良品种越来越多,对茶树品种的鉴别提出了更高的要求。SSR(Simple sequence repeat,简单重复序列)分子指纹图谱鉴定技术具有简便、迅速不受环境条件影响等优点,非常适合品种鉴定。本研究以254个优良茶树品种为材料,从前期构建的遗传连锁图谱上选出185个SSR标记,分析了我国茶树品种的遗传多样性水平,并通过筛选出的核心引物,构建了较全面的茶树品种分子指纹图谱。主要研究结果如下: 1.从185个SSR标记中初步筛选出了128个扩增条带清晰、稳定的SSR标记。不同连锁群上的SSR标记检测到的平均等位基因数、基因型个数、多态性息含量均有较大差异。根据引物扩增条带易统计程度,PIC(Polymorphism information content,多态性息含量)和基因型个数,筛选了2套均匀分布于15连锁群上的30对核心引物。理论上任意两个品种可能混淆的概率为6.0×10-13。同时,通过标准误的变化,250个茶树品种遗传多样性研究至少需要30对SSR引物。 2.利用128个SSR标记分析了我国茶树优良品种的遗传多样性水平,在254个茶树品种中共检测到629个等位变异,平均观测杂合度HO为0.43,期望杂合度HE为0.54。Shannon信息指数(I)平均为1.03。PIC平均为0.5,基因多样性指数平均为0.54。从地理区域来看,云南、广东、重庆的品种基因多样性水平较高,达到0.5以上;台湾的品种遗传多样性水平最低,只有0.29。从不同时期分析,2000s育成品种的基因多样性水平最高,达到0.54,其次是1990s,2010s,1980s最低。比较不同年代间平均遗传距离的变化,发现1980s品种遗传距离为0.30,1990s上升到0.32,此后呈下降的趋势。基于遗传距离的N-J(Neighbor-joining)聚类将茶树品种分为3个大类群,基于Structure数学模型的算法则将所有材料分为5个亚群。 3.应用毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)荧光标记检测分析手段与聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)银染检测技术,选用30对核心引物分别分析了254个品种的基因分型结果。通过比较发现,CE比PAGE多检测出63个总等位变异数,平均每个位点上多检测出2个等位基因、7个基因型,所检测到的引物PIC和引物鉴别能力(Power of discrimination, PD)也更高。CE荧光标记检测可以直接读出目标DNA片段的准确大小,检测数据更为精确。将毛细管电泳片段大小数据转变成基因型格式,并以第一套优先引物,构建了254个茶树品种的指纹图谱。