当归四逆汤是《伤寒论》的经典名方,由当归、桂枝、白芍、通草、细辛、甘草、大枣等7味中药组成,具有温经散寒、养血通脉的功效。现代药理活性研究表明当归四逆汤具有抗凝血药效。然而,该复方与抗凝血药效相关的化学成分研究未见文献报道,本论文运用高效液相色谱(HPLC)和核磁共振(1H-NMR)等分析技术,采用组效关系研究思路初步锁定当归四逆汤与抗凝血药效相关的化学成分群,结合代谢组学的研究模式,探讨当归四逆汤抗凝血作用机制,并为其他中药复方研究提供参考。采用HPLC技术对当归四逆汤、缺味复方及单味药材进行图谱采集。以小鼠凝血酶时间为指标,对当归四逆汤及缺味复方的凝血酶时间进行测定。采用正交投影偏最小二乘法(Orthogonal Partial Least Squares,OPLS),对当归四逆汤HPLC图谱数据和凝血酶时间药效数据之间的内在联系进行组效分析,根据变异权重参数值(Variable importance in projection,VIP)来辨识对活性贡献较显著的活性成分群,对贡献较大的17个色谱峰进行了复方药材来源的归属,其中,有5个峰来自于当归,5个峰来自于桂枝,4个峰来自于甘草,4个峰来自于白芍。并初步鉴定了其中6个成分,分别为甘草苷(2)、甘草酸(3)、阿魏酸(7)、异甘草苷(10)、芍药苷(12)、肉桂酸(13)。同时,采用均匀设计得到当归四逆汤各药材不同配比的16种组方,和原方共同进行HPLC图谱采集和小鼠凝血酶时间的测定,采用夹角余弦方法计算16个样品中17个贡献较大的色谱峰与原方的相似度,结果显示其范围为0.65-0.99;对于药效贡献较大的17个色谱峰,在选择不同峰数量(1～17)作为相似度计算参数的标准下,采用皮尔逊相关分析(Pearson correlation)对16个样品与复方的相似度和16个样品与复方的凝血酶时间差值的倒数(相差百分率/1)进行相关性分析,以考察不同峰数量对药效的代表性,当峰数为17时,其相关系数(R)为0.821,表明两变量具有高度的相关性。因此,17个色谱峰可作为当归四逆汤与抗凝血药效相关的特征峰。该研究建立了一种寻找药效化学活性成分的分析方法。采用1H-NMR技术分析当归四逆汤给药后小鼠血浆的代谢变化,结合http://hmdb.ca/数据库和已有文献鉴定了 9种潜在的生物标记物,分别为异丁酸、肉碱、酪氨酸、苯丙氨酸、甘油、赖氨酸、异亮氨酸、组氨酸和胆固醇。与空白组相比,复方组中异丁酸、肉碱、苯丙氨酸、甘油、组氨酸和胆固醇等6种潜在生物标记物具有显著性差异,采用Metaboanalyst进行代谢通路归属,发现6种潜在生物标记物分别涉及苯丙氨酸代谢、组氨酸代谢、甘油和胆固醇代谢等通路;因此,在当归四逆汤延长凝血酶时间的过程中,推测苯丙氨酸代谢、组氨酸代谢、甘油和胆固醇代谢等通路均参与了其起效作用过程。本研究从系统生物学的角度对复方当归四逆汤作用于复杂机体系统后抗凝血活性的起效机制进行了探讨,为其抗凝血机制的进一步研究提供了科学的思路。