论文部分内容阅读
目的:观察罗格列酮对哮喘大鼠细胞核因子-Kappa B(nuclear factor-[kappa]B,NF-κB)、血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。建立大鼠哮喘模型,通过观察罗格列酮干预后肺组织NF-κBp65表达及血清TGF-β1浓度的变化,探讨NF-κB在气道炎症及重塑中的作用及罗格列酮对其影响。方法:将30只清洁级SD大鼠(雌性,6周龄,体重120g-150g之间)随机分成正常对照组、哮喘模型组和罗格列酮干预组,每组10只。哮喘组大鼠于实验第1、8天腹腔注射卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)100mg和氢氧化铝100mg(混于生理盐水2m L中)进行致敏。第15天起将大鼠置于自制的非完全密闭雾化吸入箱内,给予OVA溶液雾化吸入,隔日1次,每次30min,共激发20次。卵清蛋白溶液浓度按照1%、1.5%、2%、2.5%、3%依次递增,每4次激发后调整一次。正常对照组以等量生理盐水代替OVA,方法同上。罗格列酮组则在每次OVA雾化吸入前30min按5mg/kg经口腔灌服方式给予大鼠罗格列酮。末次激发24小时后用1%戊巴比妥钠麻醉大鼠,取材。收集各组大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、血清及肺组织。测定BALF中细胞计数及分类;部分肺组织行病理切片,行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察形态学变化,并应用计算机图像分析软件测定支气管管壁厚度(总管壁面积/支气管基底膜周径)、支气管平滑肌厚度;分别用RT-PCR及免疫组化的方法测定肺组织中NF-κBp65的表达,应用图像分析软件测定NF-κBp65的相对表达强度;ELISA法测定血清中TGF-β1的浓度。结果:1哮喘模型的建立通过腹腔注射卵清蛋白致敏及反复雾化吸入激发的方式成功建立大鼠哮喘模型,于实验过程中可见哮喘大鼠精神萎靡、烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛、站立不稳、反应迟钝等表现。2支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数及分类:哮喘组BALF中细胞总数(35.21±0.51)高于罗格列酮组(14.98±0.67),差异具有统计学意义(P<0.01);且其均高于正常对照组(9.49±0.10),差异具有统计学意义(F=7563.975,P<0.01)。哮喘组BALF中性粒细胞数(0.26±0.05)高于罗格列酮组(0.58±0.05),差异具有统计学意义(P<0.01);且其均高于正常对照组(0.26±0.05),差异具有统计学意义(F=664.996,P<0.01)。哮喘组BALF淋巴细胞数(2.83±0.08)高于罗格列酮组(2.15±0.04),差异具有统计学意义(P<0.01);且其均高于正常对照组(1.31±0.03),差异具有统计学意义(F=1966.297,P<0.01)。哮喘组BALF嗜酸性粒细胞数(3.53±0.06)高于罗格列酮组(1.27±0.06),差异具有统计学意义(P<0.01);且其均高于正常对照组(0.52±0.08),差异具有统计学意义(F=5294.103,P<0.01)。3病理图像分析结果:哮喘组大鼠肺组织病理切片可见气管及血管周围炎症细胞明显增多,支气管黏膜破坏、上皮细胞脱落、粘液分泌增多,气道平滑肌明显增厚。罗格列酮干预后可明显减轻以上病理改变。图像分析结果示:哮喘组大鼠的气道壁厚度(μm2/μm)与平滑肌厚度(μm2/μm)(98.49±2.58;45.29±2.26)均高于罗格列酮组(86.03±2.63;33.54±1.35),有统计学意义(P<0.01);两组又均高于对照组(70.75±2.10;17.62±1.12),有统计学意义(F=323.15,P<0.01;F=704.562,P<0.01)。4 RT-PCR测定肺组织NF-κBp65m RNA的表达:哮喘组大鼠肺组织NF-κBp65m RNA表达(0.741±0.020)高于罗格列酮组(0.490±0.024),存在统计学意义(P<0.01);且两组均高于正常对照组(0.342±0.003),存在统计学意义(F=1267.128,P<0.01)。5免疫组化法测定肺组织NF-κBp65的表达:哮喘组大鼠肺组织中NF-κBp65的平均光度值(0.51±0.09)高于罗格列酮组(0.42±0.04),有统计学意义(P<0.01);两组均高于对照组(0.27±0.06),有统计学意义(F=36.109,P<0.01)。6 ELISA法测定血清中TGF-β1的含量(ng/ml):哮喘组大鼠血清中的TGF-β1含量(30.63±1.76)高于罗格列酮组(23.57±0.97),有统计学意义(P<0.01),两组均高于对照组(17.13±1.13),有统计学意义(F=257.16,P<0.01)。7相关性分析结果:肺组织中NF-κBp65m RNA及NF-κBp65含量与BALF中细胞总数呈显著正相关(r=0.979,P<0.01;r=0.777,P<0.01),与血清TGF-β1的表达水平呈显著正相关(r=0.965,P<0.01;r=0.907,P<0.01);TGF-β1与平滑肌厚度显著正相关(r=0.986,P<0.01)。结论:1通过抗原致敏和反复雾化激发,成功建立了大鼠哮喘模型。病理结果显示哮喘组大鼠气道中存在明显的炎性细胞浸润、气道壁及平滑肌增厚,而罗格列酮干预可明显减轻上述病理表现。2哮喘组大鼠肺组织中NF-κBp65在基因和蛋白水平的表达明显高于对照组,提示哮喘的发生可能与NF-κB信号转导通路的激活有关。罗格列酮组大鼠肺组织中NF-κBp65在基因和蛋白水平的表达均低于哮喘组而髙于对照组,提示罗格列酮可抑制NF-κB信号转导通路的激活。3罗格列酮可降低哮喘大鼠血清中TGF-β1的水平,可减轻气道重塑。4相关性分析结果显示大鼠肺组织NF-κBp65的表达水平与BALF中细胞数及血清中TGF-β1的表达呈正相关,TGF-β1与平滑肌厚度呈正相关。表明罗格列酮可能通过抑制NF-κB信号转导通路抑制哮喘的气道炎症及重塑。