三种DNA片段在小鼠体内共整合的研究

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该实验以小鼠为研究对象,采用两种基因-HAS cDNA、hFEN1和一种非编码大片段DNA进行共注射,旨在探索非编码大片段DNA对HAS和hFEN1基因整合的影响及建立提高HAS基因整合效率的转基因动物的方法,同时,探索多基因转基因动物建立的策略,以便寻求一种既节省时间,而又简单经济的转基因方法,为以后的研究提供一点的探索性经验和参考.得出以下结论:1.以PCR扩增的人血清白蛋白(HAS)基因片段为探针,从人的基因组文库中杂交筛选的阳性克隆中,经测序分析,有一个克隆含有全长HAS DNA,用从其它的阳性克隆中选取两种DNA片段,即DNA修复基因hFEN1和一段非编码大片段CIT987SK-384D8,与人HAS DNA一起,进行显微共注射,成功制备了转多基因小鼠.2.用显微注射法分批把这三种不同的DNA片段导入小鼠受精卵雄原核,并移植入假孕受体鼠,产生的65只F1代小鼠中,经PCR和Southern杂交检测,表明转入的基因在12只小鼠体内有整合段.3.非编码大片段DNA CIT987SK-384D8对HAS基因和hFEN1基因整合有某种促进作用,这与内含子对基因整合有促进作用相吻合,也与Brinster的研究结果一致.4.HAS基因与hFEN1基因在小鼠体内的整合相互之间基本无影响.5.非拮抗基因(转移基因的表达产物互不抑制)的共转移(显微注射法)是一种既经济、又有效的方法.
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