AIV人工传代后毒力与基因变异特点的研究

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该论文对1996年分离的鹅源H5N1亚型AIV毒株(OR株)、OR株经鸡胚连续传代获得的第20代(F20株)、40代(F40株)、40代(F60株)、100代(F100株),以及1996年以来,在禽流感研究的攻毒过程中从鸡体回收而获得的经鸡体繁殖5代(CF5株)、10代(CF10株)、15代(CF15株)、20代(CF20株)等共9个病毒进行毒力与基因变异的研究.应用RT-PCR方法,利用自行设计的引物,成功且特异地扩增出AIV全基因组,包括HA、NA、M、NS、NP、PA、PB1、PB2等8个基因的cDNA片段.利用计算机同源模建技术,模建了OR株、CF20株及F60株三个病毒HA蛋白和NA蛋白C端的空间结构.综上所述:(1)鹅源H5N1亚型AIV经鸡胚和鸡体传代后对鸡胚的毒力有所增强.(2)鹅源H5N1亚型AIV经鸡胚传代后对鸡的毒力逐渐减弱,而经鸡体传代后对鸡的毒力逐渐增强,但仍属HPAIV范畴.(3)此鹅源H5N1亚型AIV具有免疫抑制作用.(4)鹅源H5N1亚型AIV经鸡胚和鸡体传代后,HA蛋白切割位点及HA蛋白受体结合位点虽未发生改变,但其它位置的点突变引起HA蛋白切割位点的空间结构以及构成HA蛋白受体结合位点的第98、225位氨基酸残基侧链取向发生了改变,这可能是导致传代后毒力和对鸡体适应能力变化的原因之一.(5)鸡体传代病毒CF15及CF20株HA1多肽新的潜在糖基化位点的产生,可能与鹅源AIV对鸡体适应性增强有关.(6)鹅源H5N1亚型AIV经鸡体传代后NA蛋白茎区的部分氨基酸缺失,而OR株及4个鸡胚传代病毒未出现氨基酸缺失现象,因此推测NA蛋白茎区部分氨基酸缺失与AIV毒力及鹅源毒株对鸡体适应性增强有关.
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