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背景:肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存和发展的复杂环境,肿瘤微环境由细胞成分和非细胞成分组成。其中细胞成分包括肿瘤细胞本身、免疫细胞、间充质干细胞、内皮细胞、以及与肿瘤相关的成纤维细胞。当初始T细胞进入复杂的肿瘤微环境中,将受到不同细胞因子的诱导从而分化为不同类型的T细胞亚群,其中,初始T细胞在TGF-β和IL-6的共同诱导下分化为Th17。Th17细胞是一种能够分泌白介素17的辅助性T细胞亚群,许多研究证明,Th17细胞在结肠癌中起着促进肿瘤进展的作用。因此,探索一个抑制T细胞向Th17细胞分化的调控机制,对改善结肠癌的微环境具有意义。LOXL3又叫赖氨酰氧化酶3,是一种铜依赖性胺氧化酶,有研究发现,LOXL3可抑制初始T细胞向Th17分化。有测序数据显示,在LOXL3基因敲除的小鼠中SMURF1/SMURF2呈高表达,提示LOXL3可能受SMURF1/SMURF2的调控,SMURF1/SMURF2都属于素连接酶,其主要作用是连接靶蛋白,使被连接的靶蛋白通过泛素蛋白酶体途径被降解,因此,本研究的主要内容是探索SMURF1/SMURF2对LOXL3表达的调控及对Th17细胞分化的影响,以期为调控Th17细胞的分化及改善结肠癌的微环境提供新的靶点。研究内容及方法:分离人外周血T细胞;构建SMURF1、SMURF2的过表达载体,转染T细胞并进行验证;用SMURF1、SMURF2的过表达载体转染T细胞,检测LOXL3的表达水平;构建SMURF1、SMURF2的干扰沉默载体,转染T细胞并进行验证;用SMURF1、SMURF2的干扰沉默载体转染T细胞,检测LOXL3的表达水平;流式细胞学检测转染SMURF1沉默载体的T细胞中Th17的百分比;在TGFβ存在的条件下,研究T细胞中SMURF1、LOXL3的表达水平及转染SMURF1沉默载体的T细胞LOXL3的表达水平。结果:转染SMURF1过表达载体的T细胞SMURF1表达高于空载体及空白对照(P<0.05),转染SMURF2过表达载体的T细胞SMURF2表达高于空载体及空白对照(P<0.05);转染SMURF1过表达载体的T细胞LOXL3表达低于空载体及空白对照(P<0.05),转染SMURF2过表达载体及干扰载体的T细胞LOXL3的表达水平与空载体及空白对照均无统计学差异(P>0.05);转染SMURF1沉默载体的T细胞SMURF1表达低于空载体及空白对照(P<0.05),转染SMURF2沉默载体的T细胞SMURF2表达低于空载体及空白对照(P<0.05);转染SMURF1沉默载体的T细胞LOXL3表达高于空载体及空白对照(P<0.05),转染SMURF2沉默载体的T细胞LOXL3的表达水平与空载体及空白对照均无统计学差异(P>0.05);(五)转染SMURF1沉默载体的T细胞中Th17细胞的百分比低于空载体及空白对照(P<0.05);在TGFβ存在的条件下,T细胞中SMURF1表达高于对照组(P<0.05),LOXL3表达低于对照组(P<0.05),转染SMURF1沉默载体的T细胞LOXL3的表达高于空载体及空白对照(P<0.05)。结论:L0XL3蛋白可受到SMURF1的修饰,但可能不受SMURF2得修饰;通过沉默SMURF1可减少Th17的分化。