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目的 应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和随机扩增多态性DNA（RAPD）技术获取安徽省三种常见蜚蠊的可溶性蛋白质区带和DNA指纹图谱，对三种常见蜚蠊的可溶性蛋白质和基因组DNA多态性进行分析研究，为蜚蠊分类提供科学依据。方法 采集安徽省三种常见蜚蠊黑胸大蠊、美洲大蠊、德国小蠊成虫标本，进行形态学的分析鉴定。首先应用冻融匀浆法制备这三种蜚蠊的可溶性蛋白质匀浆液，进行十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE），获取三种常见蜚蠊的可溶性蛋白质区带，用考马斯亮蓝G-250染色后，观察和计算出各蜚蠊主要蛋白质区带的分子量。然后，提取三种蜚蠊的基因组DNA，进行鉴定及定量分析。确定随机扩增多态性DNA（RAPD）反应总体积、反应条件。选取5条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物，进行RAPD-PCR扩增反应。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，获得这三种蜚蠊的DNA图谱，计算出三种蜚蠊种间的遗传距离。最后对这三种蜚蠊可溶性蛋白质区带和基因组DNA多态性分析和研究。结果 用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）进行研究显示：黑胸大蠊（P.f.）雄虫和雌虫蛋白条带数目分别是29条、31条；美洲大蠊（P.am.）雄虫和雌虫蛋白条带数目分别是28条、30条；德国小蠊（B.g.）雄虫和雌虫蛋白条带数目分别是25条、28条。通过比较发现三种蜚蠊的蛋白质区带数目和位置有差别；B.g主要蛋白质区带的位置与两种大蠊相差明显，雌虫与雄虫之间也有差别。用随机扩增多态性DNA（RAPD）进行研究显示：这三种蜚蠊分别被扩增出不同数量和分子大小的DNA片段。三种蜚蠊基因 安徽医科大学硕士研究生学位论文 组DNA扩增产物中具有共同的扩增条带，这反映了三种蜚蟋基因组DNA具有同 源性；同时三种蜚烧基因组DNA扩增产物又具有各自独特的DNA条带，DNA 条带亮度上也有差别。用引物 OPA｛扩增，美洲大镰m．）在 0．73kb、0．40kb 处条带较亮；黑胸大镰（＊f）在0．70kb处条带较亮：德国小烧（B．g．）在0．52kb 处条带较亮。用引物＊PA－ic扩增，美洲大镰（P二．）在队33讪处较亮：黑胸大 螨（Rf）在 0．80kb处较亮；德国小镰（B．g．）在 0．33kb处条带较亮。用引物 OPA－15 扩增，美洲大镰（Ram．）在0．50kb、0．70kb处较亮；黑胸大镰（Pf）在0了okb和 0．85kb处较亮；德国小镰（B．g．）在0．32kb、0．53kb、0．6Ikb、0．85kb、l＊okb、1．10kb 和1．20kb处条带较亮。用引物o PAPA－16扩增，美洲大蛾（R＿．）在0．30kb、0．40kb、 O．50kb处条带较亮：黑胸大镰（尺f）在0．40kb、O．70kb处条带较亮；德国小镰（B．g．） 在0．40kb、0．94kb处条带较亮。用引物OPA－19扩增，美洲大琐（Ram．）在0．38kb、 O．52kb处条带较亮；黑胸大镰（Pf）在0．45kb0．52kb处条带较亮；德国小烧旧召．） 在0．52kb、0．85kb、l．00kb、l．20kb处条带较亮。美洲大镰与黑胸大峻遗传距离为 0．3257较近：德国小螨与黑胸大镰和美洲大螨的遗传距离分别为0石276和0．6729 较远。结论三种常见蜚镰的可溶性蛋白质区带和DNA指纹图谱大部分相同但 存在差异，这种差异可为蜚镰鉴定提供分类依据。SDS—PAGE和RAPD用于蜚焕 种类的鉴定，显示了较好的特异性和准确性，并因其简便和快速，可为蜚贱提供 新的分类方法。