犬副流感病毒的分离鉴定及结构蛋白基因的克隆与序列分析

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犬传染性呼吸系统疾病(canine infectious respiratory disease, CIRD)是由犬副流感病毒(Canine Parainfluenza Virus, CPIV)引起的一种严重危害犬业的感染性疾病。CPIV已在世界范围内广泛流行。本研究旨鉴定并分离目前国内的犬副流感流行毒株,并与其他分离株的F基因序列进行比较,筛选出新的保护性抗原位点,为亚单位疫苗的制备提供理论基础。本研究收集2011-2012年CPIV感染疑似病例标本14份,用Vero细胞进行病毒的分离培养,并通过红细胞吸附实验、动物回归试验、RT-PCR反应及序列测定对其进行鉴定。对鉴定出的菌株进行F基因的扩增,构建克隆载体,对筛选出的阳性克隆进行测序,并与国内外其他分离株构建生物进化树。本实验成功分离出一株CPIV分离株,命名为CPIV-CC。通过对其鉴定发现,该病毒接种于Vero细胞后48h可出现明显的细胞病变,具有吸附豚鼠红细胞的能力,动物回归实验表明该毒株可使健康动物出现CPIV感染的症状。成功构建F基因的克隆载体,经目的基因测序及同源性分析发现该病毒分离株与Genbank上已有的病毒分离株的同源性高达97%以上,有1处点突变。生物进化树显示,该分离株与其他CPIV分离株亲缘关系较近。本研究结果表明,本实验分离株CPIV-CC F基因鉴定为犬副流感病毒,其F基因有1处点突变,该分离株与其他犬副流感分离毒亲缘关系较近。为亚单位疫苗的制备奠定了基础。
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