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研究目的:1.研究硫酸镁(MgSO4)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamin,6-OHDA)损伤的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y是否具有保护作用。2.研究6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞后,细胞内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化,Mg SO4对其影响和意义。3.研究镁离子转运蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA及蛋白在6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞中表达量的变化,补充Mg SO4对其影响及意义。4.研究经6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞内总抗氧化能力及活性氧(reactive oxygen species,ROS)代谢有何改变,以及Mg SO4对其影响及意义。研究方法:1.用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒测定SH-SY5Y细胞对不同浓度(0.125m M~1m M)Mg SO4和6-OHDA的敏感性,以及Mg SO4对6-OHDA损伤细胞的细胞存活率的影响。2.培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、6-OHDA损伤组和Mg SO4处理组,对照组加等体积溶剂,6-OHDA损伤组加入50μM 6-OHDA孵育24h,Mg SO4处理组在损伤前1h加入0.25m M、0.5m M、1m M Mg SO4。3.通过Western Blot和细胞免疫染色,观察细胞在上述处理下TH的表达变化。4.提取细胞的RNA、蛋白质,用实时荧光定量PCR和免疫印迹(Western Blot)法检测上述处理下细胞镁离子转运蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA和蛋白表达变化。5.2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)检测上述处理下细胞总抗氧化能力的变化。6.利用荧光探针2’7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测上述处理下细胞内ROS的代谢变化。结果:1.CCK-8实验结果显示,与对照组相比,25μM~50μM的6-OHDA损伤细胞24h可降低SH-SY5Y细胞的存活率(p<0.05),其中,50μM的6-OHDA可使细胞存活率下降54.07%(p<0.05)。损伤前1h加入0.125m M~1m M的Mg SO4可提高6-OHDA损伤细胞的存活率(p<0.05)。2.Western Blot和细胞免疫荧光染色实验结果显示,SH-SY5Y细胞经6-OHDA损伤后,TH表达较正常组减少了52.23%(p<0.05),损伤前加入Mg SO4则可一定程度恢复TH的表达。1m M的Mg SO4对TH的影响具体有统计学意义(p<0.05)。3.q PCR和Western Blot实验结果显示,SH-SY5Y细胞经6-OHDA损伤后,细胞内SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2的m RNA和蛋白表达均有所下降,而损伤前1h加入Mg SO4可明显改善这一现象,与损伤组相比,0.25m M~1m M的Mg SO4使SLC41A1、CNNM2的m RNA和NIPA1、Mag T1的蛋白的表达的差异有统计学意义(p<0.05),0.5m M~1m M的Mg SO4对NIPA1和Mag T1的m RNA和SLC41A1、CNNM2的蛋白的表达的差异有统计学意义(p<0.05)。4.细胞总抗氧化能力检测和细胞内ROS测定结果显示,6-OHDA可降低细胞总抗氧化能力(p<0.05),并使细胞内产生大量ROS,而Mg SO4可增加损伤细胞的总抗氧化能力,并抑制ROS的生成。结论:MgSO4对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞有保护作用。镁离子转运蛋白SLC41A1、NIPA1、Mag T1和CNNM2可能与PD的发生发展相关。