巨大芽孢杆菌酯酶拆分制备培南类药物中间体的研究

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培南类药物是迄今为止抗菌谱最广、抗菌活性较强的抗生素,因此在国内及全球的使用量迅速增长。目前上市的培南类药物有亚胺培南、帕尼培南、法罗培南、多尼培南等。通过不同气相色谱条件建立了四氢糠酸甲酯,3-羟基丁酸乙酯、乳酸乙酯、扁桃酸甲酯手性气相色谱分析方法,具有较好的的分离度,达到要求的精密度。本研究从实验室保藏的菌株中筛选得到了一株对四氢糠酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯(3-EHB)具有较高立体选择性的产酯酶菌株巨大芽孢杆菌WZ009(Bacillus megaterium WZ009).论文对巨大芽孢杆菌WZ009酯酶催化(R,S)-四氢糠酸甲酯不对称水解的反应条件进行了优化研究。实验确定较佳的酶反应条件为:缓冲液离子浓度0.75mol/1,pH7.2,底物浓度0.1%(V/V),菌体添加量0.25g/10ml,在此条件下反应16h,转化率和底物对映体过量值分别为61.07%和99.64%。产物R-四氢糠酸甲酯提取进行了初步条件优化,并通过核磁共振和红外光谱分析确认结构。通过巨大芽孢杆菌WZ009酯酶催化3-羟基丁酸乙酯反应条件的优化研究,得出较佳反应条件为:温度30℃,pH7.0,底物浓度为1.0%,菌体添加量0.25g/10ml。反应时间为2h时,产物的e.es值可达99%以上和转化率为55.5%,酶拆分反应效果达到较理想水平。巨大芽孢杆菌WZ009酯酶对这两种培南类药物中间体都具有较高的立体选择性和催化活性,是一种性能优良的生物催化剂,并且具有一定的稳定性,具有很好的工业化应用前景。
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