本文分析了siRNA靶向survivin基因及双干扰肿瘤相关巨噬细胞对小鼠乳腺癌的治疗作用。本研究分为两个部分：　　第一部分：　　目的：通过化学合成靶向survivin基因的siRNA干扰该基因的表达，采用体外细胞培养（体外实验）和建立荷瘤小鼠模型（体内实验）方法从分子水平、细胞水平及动物整体水平探讨化学合成的siRNA的抗肿瘤活性，为最终将siRNA在抗癌中的合理与安全应用提供理论依据。　　方法：⑴设计并化学合成三对靶向小鼠survivin基因的siRNA，筛选下调基因表达效率最高的一条siRNA；以小鼠乳腺癌4T1细胞为靶细胞，脂质体转染surivivin-siRNA，RT-PCR、Western blotting法检测下调效果及对VEGF-C表达的影响；采用MTT比色法等方法，检测该siRNA对4T1细胞增殖和凋亡的影响，transwell小室法检测对4T1细胞迁移和侵袭的影响，探讨靶向siRNA体外抗肿瘤活性作用机制。⑵4T1细胞接种Balb/c小鼠建立乳腺癌小鼠模型，观察靶向siRNA对乳腺癌肿瘤生长和肺转移的抑制情况，免疫组化法检测瘤组织内微淋巴管密度。　　结果：①RT-PCR与Western blot方法检测结果显示，我们设计的三对siRNA中，siS3转染4T1细胞对下调survivin基因表达效率最高；MTT比色结果显示该siRNA能抑制4T1细胞增殖；抑制4T1细胞的迁移和侵袭；survivin-siRNA下调了4T1细胞中VEGF-C的表达；RT-PCR和Western blot法结果显示该siRNA能够使细胞中survivin，pAKT，HIF-αand VEGF-C表达下调。②survivin-siRNA能抑制荷瘤小鼠移植瘤的增长和肺转移，免疫组化结果显示瘤组织微淋巴管密度（MLVD）显著下降。　　结论：化学合成的靶向surivivin基因的siRNA能够抑制4T1细胞增殖，促进4T1细胞凋亡，抑制4T1细胞的迁移和侵袭，抑制小鼠肿瘤生长、肺转移和淋巴管形成。Survivin-siRNA转染后4T1细胞中VEGF-C表达下降可能是AKT/HIF-1α信号通路参与介导的。　　第二部分：　　目的：探讨不同活化表型小鼠骨髓来源巨噬细胞对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭的作用，以及siRNA靶向VEGF-C和Surivivn基因双干扰对荷瘤小鼠乳腺癌的治疗作用及作用机制研究。　　方法：⑴原代获取小鼠骨髓来源的巨噬细胞，以IFN-γ和LPS诱导为经典活化的M1型巨噬细胞，以IL-4诱导为替代活化的M2型巨噬细胞，流式细胞术鉴定。qRT-PCR法检测不同极化巨噬细胞相关炎性因子的表达差异；采用Transwell系统共培养不同活化表型的巨噬细胞和4T1细胞，绘制4T1细胞生长曲线。Transwell法检测不同活化表型的巨噬细胞，对于4T1细胞迁移和侵袭的影响。ELISA法检测共培养体系所分泌的VEGF-C。⑵4T1细胞接种Balb/c小鼠建立乳腺癌小鼠模型，观察靶向survivin及VEGF-C的siRNA联合干扰对乳腺癌肿瘤生长和肺转移的抑制情况，qPCR方法检测瘤内细胞因子的含量改变，流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞中CD11c+和CD206+细胞所占比例。　　结果：①成功制备及培养出小鼠骨髓来源细胞。在共培养组中，与M2巨噬细胞共培养的4T1细胞生长速度最快，侵袭和迁移能力最强，促进4T1细胞分泌VEGF-C。而与M1巨噬细胞共培养的4T1细胞生长速度最慢，侵袭和迁移能力都受到抑制，大量分泌NO。②siRNA能抑制荷瘤小鼠移植瘤的增长和肺转移，肿瘤相关巨噬细胞与脾脏细胞相比，表达较高水平的CD206。　　结论：M2型巨噬细胞促进4T1细胞增殖，促进4T1细胞迁移和侵袭能力，而M1型巨噬细胞抑制4T1细胞增殖，促进4T1细胞分泌VEGF-C，4T1细胞迁移没有明显改变。siRNA联合干扰对荷瘤小鼠有很好的抗瘤和抗转移作用，4T1荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞在表型上更倾向于M2型巨噬细胞。