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本研究为探讨新烟碱类杀虫剂免疫化学分析的基本规律并应用于农药残留分析，以新烟碱类杀虫剂氯噻啉为研究对象，建立了氯噻啉的间接竞争ELISA法，并应用于环境和农产品样品中氯噻啉残留检测。
合成了氯噻啉半抗原，通过碳二亚胺法将半抗原偶联于牛血清蛋白(BSA)制备了免疫抗原，通过混合酸酐法偶联于卵清蛋白(OVA)制备了包被抗原，免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠获得相应的多克隆抗体和单克隆抗体。当包被抗原的浓度为4mg/L时，多克隆抗体和单克隆抗体的抗体的效价分别达2.56×106和5.12×106。
对ELISA方法中的影响因素(有机溶剂含量、盐离子浓度、pH)进行了研究，确定ELISA反应的最佳工作条件。基于多克隆抗体的ELISA法的最佳工作条件为：包被原和抗体的最佳工作浓度分别为0.5mg／L和0.4mg/L，最佳反应体系为10%的甲醇含量、pH7.4以及0.14mol/LNa+强度的磷酸盐缓冲溶液。在间接竞争酶联免疫分析的最佳检测条件下建立了氯噻啉标准竞争曲线，该方法的抑制中浓度为0.18mg/L，最低检测限为0.0018mg/L。除与吡虫啉有较大的交叉反应外，与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05-1mg/kg的氯噻啉标准溶液，平均回收率为91.42%-113.82%，变异系数为0.72%-8.68%，符合农药残留检测要求。
基于单克隆抗体ELISA法的最佳工作条件为：包被原和抗体的最佳工作浓度分别为0.65mg／L和0.4mg/L，最佳反应体系为10%的甲醇含量、pH7.4和0.14mol/L的Na+强度的磷酸盐缓冲溶液。在最佳检测条件下建立氯噻啉标准竞争曲线，该方法的抑制中浓度为0.088mg/L，最低检测限为0.018mg/L。除与吡虫啉有较大的交叉反应外，与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05-0.5mg/kg的氯噻啉标准溶液，平均回收率为80.43%-113.83%，变异系数为1.08%-8.92%，符合农药残留检测要求。
合成了氯噻啉半抗原，通过碳二亚胺法将半抗原偶联于牛血清蛋白(BSA)制备了免疫抗原，通过混合酸酐法偶联于卵清蛋白(OVA)制备了包被抗原，免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠获得相应的多克隆抗体和单克隆抗体。当包被抗原的浓度为4mg/L时，多克隆抗体和单克隆抗体的抗体的效价分别达2.56×106和5.12×106。
对ELISA方法中的影响因素(有机溶剂含量、盐离子浓度、pH)进行了研究，确定ELISA反应的最佳工作条件。基于多克隆抗体的ELISA法的最佳工作条件为：包被原和抗体的最佳工作浓度分别为0.5mg／L和0.4mg/L，最佳反应体系为10%的甲醇含量、pH7.4以及0.14mol/LNa+强度的磷酸盐缓冲溶液。在间接竞争酶联免疫分析的最佳检测条件下建立了氯噻啉标准竞争曲线，该方法的抑制中浓度为0.18mg/L，最低检测限为0.0018mg/L。除与吡虫啉有较大的交叉反应外，与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05-1mg/kg的氯噻啉标准溶液，平均回收率为91.42%-113.82%，变异系数为0.72%-8.68%，符合农药残留检测要求。
基于单克隆抗体ELISA法的最佳工作条件为：包被原和抗体的最佳工作浓度分别为0.65mg／L和0.4mg/L，最佳反应体系为10%的甲醇含量、pH7.4和0.14mol/L的Na+强度的磷酸盐缓冲溶液。在最佳检测条件下建立氯噻啉标准竞争曲线，该方法的抑制中浓度为0.088mg/L，最低检测限为0.018mg/L。除与吡虫啉有较大的交叉反应外，与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05-0.5mg/kg的氯噻啉标准溶液，平均回收率为80.43%-113.83%，变异系数为1.08%-8.92%，符合农药残留检测要求。