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第一部分胰岛β细胞系β-TC-6的培养、生物学特性及葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应的研究目的探讨胰岛β细胞系β-TC-6的培养方法、生物学特性及葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应。方法观察β-TC-6细胞培养时间内的形态变化及其增殖、生长规律；分别以0mM、1.38mM、5.5mM、11.1mM葡萄糖刺激β-TC-6细胞的胰岛素分泌(GSIS),用放免法检测细胞上清液中的胰岛素浓度。结果培养过程中β-TC-6细胞生长状态良好呈多角形,传代48小时后进入增殖生长期；β-TC-6细胞在含0.1%BSA的KRBH液中孵育630分钟,1.38mM葡萄糖刺激时胰岛素分泌达高峰,5.5 mM、11.1 mM葡萄糖刺激时胰岛素分泌较1.38mM时下降。结论β-TC-6细胞生长状态良好,增殖能力强,并保持了β细胞的生物学特性,其最适宜的葡萄糖刺激浓度为1.38mM。第二部分葡萄糖刺激活化β-TC-6细胞ERK1/2信号转导通路的研究目的探讨葡萄糖刺激下β-TC-6细胞ERK1/2信号转导通路磷酸化水平的变化。方法1、β-TC-6细胞接种于6孔板,48小时后换用无糖KRBH缓冲液培养2小时,再在含0mM、1.38mM、5.5mM、11.1mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的水平。2、β-TC-6细胞接种于6孔板,48小时后换用无糖KRBH缓冲液培养2小时,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育0分钟、5分钟、15分钟、30分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的水平。结果1、β-TC-6细胞在1.38mM葡萄糖刺激时ERK1/2磷酸化水平达高峰,5.5 mM、11.1 mM葡萄糖刺激时ERK1/2磷酸化水平较无葡萄糖刺激时升高,但较1.38mM葡萄糖刺激时下降。2、β-TC-6细胞在1.38mM葡萄糖刺激5分钟时ERK1/2磷酸化水平达高峰,随着刺激时间的延长ERK1/2磷酸化水平逐渐下降,30分钟时ERK1/2磷酸化水平下降到无葡萄糖刺激时水平。结论葡萄糖刺激可活化β-TC-6细胞ERK1/2信号转导通路。第三部分ERK1／2信号转导通路在β-TC-6细胞葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应中的作用的研究目的研究MEK抑制剂PD98059对β-TC-6细胞葡萄糖刺激下ERK1/2信号转导通路及胰岛素分泌功能的影响。方法1、β-TC-6接种于6孔板,47.5小时后加入PD98059(2uM、10uM、50uM)30分钟后,换用无糖KRBH缓冲液培养2小时,再在含1.38mM葡萄糖浓度的KRBH缓冲液中孵育5分钟,收集细胞,用蛋白质免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2的程度。2、β-TC-6接种于24孔板,47.5小时后加入PD98059(2uM、10uM、50uM)30分钟后,换用无糖KRBH缓冲液培养30分钟,再在含1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵60分钟,用放免法检测细胞上清液中胰岛素浓度。结果1、PD98059可抑制p-TC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化,作用与剂量呈正相关。2、PD98059可抑制β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,作用与剂量呈正相关。结论ERK1/2信号转导通路可能在β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应中发挥重要作用。第四部分炎性细胞因子IL-1β、IFN-γ对β-TC-6细胞葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应的影响的研究目的研究炎性细胞因子IL-1β、IFN-γ对胰岛β细胞株β-TC-6葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应的影响。方法β-TC-6接种于24孔板,24小时后加入IL-1β(0.15ng/ml、1.5ng/ml)和／或IFN-γ(10u/ml、100u/ml),24小时后,换用无糖KRBH缓冲液培养30分钟,再在含0mM或1.38mM葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60分钟,用放免法检测细胞上清液中胰岛素浓度。结果IL-1β(0.15ng/ml、1.5ng/ml)或IFN-γ(10u/ml、100u/ml)或联合(IL-1β0.15ng/ml、IFN-γ100u/ml)作用于β-TC-6细胞时胰岛素浓度与单纯葡萄糖刺激组相比均下降,且IL-1β与IFN-γ联合有协同作用。结论IL-1β、IFN-y对β-TC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应有损伤作用。