非衍生化水溶性甲壳素的制备及其生物活性研究

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本论文研究了制备非衍生化、低脱乙酰度、水溶性甲壳素的新工艺,并探讨了水溶性甲壳素脱乙酰度及分子量的测定方法。通过比较不同脱乙酰度、不同分子量的水溶性甲壳素的抑菌活性、促凝血活性和抗癌活性,初步探讨了其构效关系。 详细研究了非衍生化手段制备低脱乙酰度水溶性甲壳素的工艺条件,通过单因素实验,对溶胀时间、NaOH终浓度和碱化处理时间进行优化,得到三种得率较高、脱乙酰度低的水溶性甲壳素的制备方法:溶胀24 h,NaOH终浓度为15%,碱化处理96 h,产品脱乙酰度为36.97%;溶胀24 h,NaOH终浓度为12%,碱化处理120 h,产品脱乙酰度为28.36%;溶胀12 h,NaOH终浓度为15%,碱化处理96 h,产品脱乙酰度为35.99%。通过对甲壳素原料进行酸解、超声波和H2O2氧化降解预处理,并采用优化的工艺条件,对原有的工艺进行改进,产量提高3倍多,并缩短1/3反应处理时间。 利用红外光谱、1H-NMR和圆二色性谱比较了不同工艺制备的不同脱乙酰度水溶性甲壳素结构上的差异,乙酰基以及基团之间形成的氢键的多寡是不同样品之间的最大差异,而且其结晶度和立体构型也有差别。 水溶性甲壳素的抑菌实验表明,水溶性甲壳素对革兰氏阳性菌的抑制效果要好于阴性菌,脱乙酰度和分子量对抑菌效果都有影响,并且对于不同的菌种,变化趋势是不同的,但是大分子的水溶性甲壳素的抑菌效果总是要好于甲壳素低聚糖和壳寡糖。 水溶性甲壳素的促凝血实验表明,水溶性甲壳素有较好的促凝血活性,而且脱乙酞度低的水溶性甲壳素的活性要好于脱乙酞度高的。通过对其凝血机理的研究发现,水溶性甲壳素的促凝血效果主要是通过对外源性凝血系统和影响凝血酶活性而实现的,并且水溶性甲壳素对血小板和红细胞的聚集也有促进作用。 水溶性甲壳素的抗癌细胞实验表明,水溶性甲壳素具有较好的抑制癌细胞增殖的活性,流式细胞仪结果显示水溶性甲壳素能引起肺癌肿瘤细胞A549的凋亡。
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