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乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染是世界性难题,不仅会造成急、慢性肝炎,而且与肝硬化和肝癌的发生密切相关。全世界约有3.5亿HBV慢性感染者,每年死于肝癌的约为32万。我国现有乙型肝炎患者约为1200万。
目前用于抗HBV治疗的抗病毒药物中单一药物治疗乙肝根本不能达到患者的理想状态,参考治疗艾滋病的经验,人们推测合理的联合药物治疗可以提高药物疗效,由于拉米夫定的诸多优点,大多数联合治疗试验均将其纳入,加之中医药在治疗中恢复肝功能、防止肝纤维化、调整免疫机能等方面都有一定的优势,拉米夫定联合中药治疗慢性乙型肝炎的思路已经成为新的研究方向。通过我们前期的研究结果,已经筛选出具有抗病毒功效的药物组合--拉米夫定联合原儿茶酸。
研究HBV的常用肝癌细胞系包括HepG2、Huh6、Huh7等,这些细胞系都具有绝大部分肝细胞特异的功能,能分泌主要的血浆蛋白。HepG2.2.15细胞是来源于HepG2细胞,整合了ayw型HBV全基因组,能够部分模拟HBV的生活周期,表达各种HBV产物并能分泌HBVDane颗粒的稳定的人类肝癌细胞株,更接近于人体肝细胞内环境的实际情况,被研究者广泛应用于HBV复制的研究。
本文研究了拉米夫定与原儿茶酸药物组合抑制乙肝病毒(HBV)复制的分子生物学和细胞生物学机理。Huh7细胞转染五种不同的HBV基因启动子质粒后,分别与药物作用一定时间,测定各组荧光值,分析药物对HBV五种基因启动子的调控作用。Huh7细胞转染外源性GFP-HBx融合质粒后,分别与药物作用一定时间,利用共聚焦荧光显微镜观察药物对外源性HBVX蛋白在细胞内分布的影响。HepG2.2.15细胞与药物作用一定时间后,用Westernblot分析药物对内源性HBVX蛋白在细胞核内含量的影响。
结果显示不同浓度拉米夫定、原儿茶酸及其药物组合对HBV启动子(含两个增强子)有不同程度的抑制作用,且联合用药效果最好。拉米夫定及其与原儿茶酸的药物组合对HBVX蛋白的入核有抑制作用,且联合用药效果最好。实验结果说明,拉米夫定与原儿茶酸药物组合对HBV启动子及HBVX蛋白入核的抑制,是该药物组合抑制HBV复制的重要作用途径之一。