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肉牛养殖过程中,因异地运输所诱发的肉牛应激反应,可造成运输肉牛机体内环境稳态遭到破坏,从而诱发肉牛多种疾病的发生,严重影响肉牛养殖业的健康发展。在运输应激发生过程中,miRNAs因其自身的生物学特性,推测其可作为新兴的应激候选诊断标志物。因此,本研究选取15头杂交肉牛,随机分组后以时速80 km,公路运输0 h、3 h、6 h以构建运输应激肉牛模型,按照模型构建条件,运输刺激后,分别采集血液、肝脏、脾脏等组织样品,评估肉牛运输应激状态,并筛选出运输应激肉牛肝脏miRNAs候选诊断标志物。ELISA方法检测结果显示,运输6 h后,肉牛血清中细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10,应激激素CORT以及应激相关蛋白Hp、SAA、CRP和HSP70浓度均显著上调(P<0.05),肝脏和脾脏SAA、HP及HSP70浓度显著升高(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,运输6 h后,肝脏中SAA mRNA的表达量显著升高(P<0.05);肝脏中HSP70 mRNA和CRP mRNA的表达量极显著升高(P<0.01);脾脏中SAA mRNA、HSP70 mRNA和CRP mRNA表达量显著升高(P<0.05)。而运输3 h后,肉牛血清中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、HSP70、CRP均无显著变化。综合评估,以速度80km/h,公路运输6 h可促使肉牛发生应激反应。因此,采用上述条件构建肉牛运输应激模型。高通量测序结果显示,运输应激6 h后,肉牛肝脏组织共计2029个miRNAs上调,1590个miRNAs下调。通过RNAhybrid和miRanda预测软件取交集预测到21946个靶标数用于3619个差异表达的miRNAs。GO富集结果显示,差异表达的miRNAs的靶基因参与细胞过程,代谢过程等重要生物学过程。KEGG途径富集分析显示,差异表达的miRNAs的靶基因主要参与MAPK信号传导、甲状腺激素信号传导、粘着斑、cAMP信号转导等途径。预测MAPK信号转导途径(ko04010)和粘着斑途径(ko04510)是运输应激条件下参与的重要途径。采用qRT-PCR技术检测miR-31、miR-122、miR-30a、miR-125b、miR-152、miR-186、miR-199a、miR-455、novel-1624、novel-2108、novel-205、novel-817,结果与高通量测序结果一致。其中,miR-186表达稳定,差异显著,参与对刺激的反应等重要生物过程,可考虑作为应激候选诊断标志物。综上所述,以速度80 km/h公路运输6 h可促使肉牛处于运输应激状态,miR-186参与代谢过程、对刺激的反应等重要生物过程,考虑作为应激候选诊断标志物。