Vogt—小柳原田(VKH)综合征和Behcet病是我国最为常见和致盲率最高的两种葡萄膜炎类型。目前一般认为它们是由自身免疫反应所介导的疾病。以往认为Th1细胞是导致葡萄膜炎发生的效应细胞，近年的研究发现，IL—23/IL-17(IL-17主要为Th17细胞分泌)在VKH综合征发病中起着重要作用(Chiw，YangP，LiB，etal.JAllergyclinimmunol，2007，119，1218-1224.)。究竟是Th1细胞在葡萄膜炎的发生中起作用，还是Th17细胞，或者是二者同时起作用，目前尚不清楚。 临床上一般用激素和免疫抑制剂对这两种葡萄膜炎进行治疗，取得很好的临床效果。近年来，生物制剂在葡萄膜炎中的治疗作用受到广泛关注，并且取得较好的临床效果。但有关这些药物作用的确切机制目前尚不清楚。 本论文正是基于上述背景，进行了以下三个方面的实验：(1)探讨Th1和Th17细胞在VKH综合征发病中的作用；(2)探讨常用的免疫抑制剂是否通过抑制Th1、Th17细胞来发挥作用。(3)探讨生物制剂能否抑制IL-17的产生，以及其可能的机制。通过上述研究，以期对葡萄膜炎的发病机制有更深入的认识，为其防治研究寻找新的靶点。同时通过对常用药物作用机制的研究，以期为临床治疗提供理论基础和指导。 第一部分Th1和Th17细胞在Vogt—小柳原田综合征发病中的作用 1、目的:研究Th1和Th17细胞在VKH综合征发病中的作用。 2、方法: 2.1分别抽取活动期未用药的和用药后静止期的VKH综合征患者(各8人)和正常人(8人)外周静脉血，分离这些患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)。 2.2采用ELISA方法检测上述这些患者和正常人PBMC培养上清中IL-17和IFN—γ的水平。 2.3应用流式细胞仪检测用药前后，分别处于活动期和静止期的VKH综合征患者以及正常人外周血中Th1、Th17细胞的比例。 2.4抽提细胞总RNA，反转录后用PCR技术检测上述患者和正常人PBMC中Th1和Th17细胞因子及其转录因子T—bet和RORgammat的水平。 3、结果: 3.1VKH综合征患者和正常人PBMC中Th17细胞的比例。活动期VKH综合征患者外周血中CD4+IFN—γ+细胞(Th1细胞)和CD4+IL-17+细胞(Th17细胞)比例显著高于静止期患者和正常人；VKH综合征患者外周血中同时还存在CD8+IL-17+细胞和CD4+IFN—γ+IL-17+细胞，而且这两群细胞的比例在活动期葡萄膜炎患者中明显高于静止期患者和正常人。 3.2VKH综合征患者和正常人PBMC中IL-17的水平。结果显示：活动期VKH综合征患者PBMC培养上清中IL-17的水平显著高于静止期患者和正常人。 3.3VKH综合征患者和正常人PBMC中IFN—γ的水平。结果显示：活动期VKH综合征患者PBMC培养上清中IFN—γ的水平显著高于静止期患者和正常人。 3.4VKH综合征患者和正常人PBMC中细胞转录因子的水平。结果显示：活动期VKH综合征患者PBMC中IL-17，IFN—γ，T—bet和RORgammat的水平显著高于静止期患者和正常人。 4、结论: 我们的研究证实，这两群细胞的比例，细胞因子的分泌及细胞转录因子的表达均与葡萄膜炎的活动性相关。提示Th1和Th17细胞参与了VKH综合征的发病。 第二部分环孢素A和激素治疗VKH综合征的作用机制研究 1、目的:研究环孢素和激素是否通过抑制Th1、Th17或两者来发挥其治疗VKH综合征的作用。 2、方法: 2.1抽取8例近两个月未用过任何免疫抑制剂的活动期VKH患者的外周血。然后给予这些患者环孢素A(3.0-5.0mg/kg/day)和口服激素(15-20mg/d)治疗，三个月后再次采集其外周血。正常人作为对照。 2.2分离上述患者的PBMC，用流式细胞仪检测环孢素治疗前后患者外周血中Th1、Th17细胞的比例。 2.3分离上述患者的PBMC，体外培养，用ELISA检测治疗前后患者PBMC培养上清中IL-17和IFN—γ的水平。 2.4体外用不同浓度的环孢素和激素刺激活动期未用药患者的PBMC，用流式细胞仪检测环孢素和激素在体外对Th1、Th17细胞比例的影响。 2.5体外用不同浓度的环孢素和激素刺激活动期未用药患者的PBMC，用ELISA评价环孢素和激素在体外对IL-17、IFN—γ的产生的影响。 3、结果: 3.1用环孢素和激素治疗以后患者外周血中Th1细胞和Th17细胞比例较用药前显著下降，达到和正常人相当的水平。 3.2用环孢素和激素治疗以后的患者PBMC分泌IL-17和IFN—γ的水平较用药前显著下降。 3.3环孢素和地塞米松在体外可以下调活动期VKH综合征患者Th1、Th17细胞的比例。 3.4环孢素和地塞米松在体外可以显著抑制活动期VKH综合征患者PBMC分泌IL-17和IFN—γ，且两种药物的作用在一定范围内都呈剂量依赖性。联合环孢素和激素可以起到协同的作用。 4、结论: 我们的研究证实，环保素和激素通过同时抑制Th1、Th17细胞来发挥其治疗VKH综合征的作用。联合两种药物可以起到协同作用。 第三部分IFN—α治疗Behcet病的作用机制研究 1、目的:研究IFN—α是否能够抑制Behcet病患者表达IL-17，以及具体的作用机制 2、方法 2.1抽取8例活动期未用药的Behcet病患者和16例正常人外周血，分离PBMC。 2.2体外用重组的IFN—α和活动期Behcet患者PBMC共同培养，用ELISA检测IFN—α对IL-17产生的影响。同时检测同一细胞培养上清中IL-10的水平。 2.3体外用重组IFN—α和PBMC共培养，同时加入IL-10的阻断抗体，用ELISA评价阻断IL-10是否可以阻断或部分阻断IFN—α对IL-17的抑制作用。 2.4体外用重组IL-10和PBMC共培养，用ELISA进一步评价IFN—α是否通过IL-10来发挥其抑制IL-17的作用。 3、结果: 3.1IFN—α可以抑制活动期Behcet病患者PBMC分泌IL-17，同时可以诱导IL-10的产生。且IFN—α的这种作用，在一定范围内呈剂量依赖性。 3.2加入IL-10的阻断抗体后，IFN—α抑制活动期Behcet患者PBMC产生IL-17的作用显著降低。 3.3体外重组的IL-10可以显著抑制活动期Behcet患者PBMCIL-17的产生。 4、结论:IFN—α可能通过促进IL-10的产生，抑制IL-17的产生。