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目的:基于肺癌转移之“正虚伏毒”核心病机,从“伏毒”角度构建符合肺癌临床转移的体内外研究模型,建立人肺腺癌循环肿瘤细胞（CTC-TJH-01）悬浮培养体系,明确悬浮培养CTC-TJH-01细胞的生物学特性,揭示中医“伏毒”的现代科学内涵;探讨金复康及其组分重楼皂苷Ⅶ诱导休眠状态CTC-TJH-01细胞凋亡抑制肺癌转移的作用;体内外验证重楼皂苷Ⅶ诱导休眠CTC-TJH-01细胞凋亡的分子机制。方法:1、模拟人体内环境,观察悬浮培养对CTC-TJH-01细胞生物学特性的影响;2、CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术测凋亡方法,与化疗药物顺铂、紫杉醇相比,探讨中药金复康对休眠状态CTC-TJH-01细胞毒性和凋亡的影响;3、采用CCK-8细胞增殖实验检测金复康所含二种有效单体对休眠状态CTC-TJH-01细胞毒性的作用,从中筛选出最佳的有效单体;4、采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对休眠状态CTC-TJH-01细胞周期和细胞凋亡的影响;Hoechst 33258染色实验观察重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01细胞凋亡的影响;5、用RNA-seq测序分析,与休眠状态CTC-TJH-01细胞相比,探讨重楼皂苷Ⅶ干预休眠状态CTC-TJH-01细胞差异基因富集的信号通路,推测与肺癌转移相关的凋亡信号信号通路和基因;6、采用Western Blot实验检测和验证重楼皂苷Ⅶ干预休眠状态CTC-TJH-01细胞凋亡相关蛋白表达情况,探讨重楼皂苷Ⅶ诱导休眠状态CTC-TJH-01细胞凋亡的分子机制;7、NOD-Scid小鼠尾静脉注射悬浮培养CTC-TJH-01细胞,构建肺癌转移动物模型,用重楼皂苷Ⅶ及化疗药紫杉醇干预,肺转移瘤计数、HE染色、免疫组化、TUNEL检测等评估重楼皂苷Ⅶ对转移瘤的影响,从而探讨体内重楼皂苷Ⅶ抑制休眠状态CTC-TJH-01细胞肺转移的作用及机制。结果:1、与贴壁培养相比,悬浮培养状态下CTC-TJH-01细胞聚集成团簇,其CFSE荧光保留强度亦显著增强,时间越长越明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）;悬浮培养可诱导CTC-TJH-01细胞发生周期阻滞,使细胞阻滞于G1期,具有明显差异（P＜0.01）;悬浮培养的CTC-TJH-01细胞Ki-67蛋白表达显著减少,处于休眠状态;2、与化疗药物顺铂、紫杉醇相比,金复康对休眠状态CTC-TJH-01细胞毒性作用明显,可明显抑制细胞增殖。与对照组相比,金复康在250μg/m L浓度时可诱导休眠状态的CTC-TJH-01细胞发生凋亡,差异具有统计学意义（P＜0.05）;3、与对照组相比,重楼皂苷Ⅶ在2.5、5、10、20μmol/L浓度时可显著减少休眠状态CTC-TJH-01细胞的存活率,有统计学差异（P＜0.001）。实验得出重楼皂苷Ⅶ的IC50=3.6μmol/L。与对照组相比,紫杉醇联合重楼皂苷Ⅶ对休眠状态CTC-TJH-01细胞不具有协同作用;4、与0μmol/L重楼皂苷Ⅶ组相比,1.8μmol/L和3.6μmol/L组重楼皂苷Ⅶ能够将休眠状态的CTC-TJH-01细胞周期阻滞在G0/G1期,差异具有统计学意义（P＜0.01）;3.6μmol/L组重楼皂苷Ⅶ可诱导细胞发生凋亡,差异具有统计学意义（P＜0.01）;1.8μmol/L、3.6μmol/L重楼皂苷Ⅶ组的CTC-TJH-01细胞核出现密度较高的蓝色荧光,药物浓度越高,细胞核蓝色荧光的密度也越高;5、与对照组相比,重楼皂苷Ⅶ干预休眠状态CTC-TJH-01细胞后,差异表达基因为585个,表达显著上调的基因有357个,表达显著下调的基因有228个（表达差异基因的筛选阈值为FDR＜0.05,log2FC＞1）。通过GO和KEGG富集分析,差异基因显著富集的信号通路为细胞周期和p53信号通路;将KEGG数据库与主要信号通路、差异基因分析,发现下游表达下调基因主要为细胞周期蛋白Cyclin-E/CDK2;6、与0μmol/L组重楼皂苷Ⅶ相比,3.6μmol/L重楼皂苷Ⅶ组能够抑制休眠CTC-TJH-01细胞的DFF45蛋白表达,显著上调Cleaved-caspase 3、p53和p21蛋白的表达,同时下调Cyclin E和CDK2蛋白的表达;7、给药9次结束,与NS组相比,重楼皂苷Ⅶ组对NOD-Scid小鼠体质量无明显影响（P＞0.05）。尾静脉接种11周加5天后处死小鼠,与NS组相比,重楼皂苷Ⅶ组NOD-Scid小鼠肺转移瘤数目显著减少,差异具有统计学意义（P＜0.01）;重楼皂苷Ⅶ组和紫杉醇组NOD-Scid小鼠肺转移瘤数目相比,无统计学意义（P＞0.05）。HE染色显示:NS组、重楼皂苷Ⅶ组和紫杉醇组三组NOD-Scid小鼠均出现肺转移瘤,肿瘤组织细胞核大、深染,结构异型性显著,且有炎细胞浸润、灶状坏死、腺样结构,证实为肺癌转移瘤组织。免疫组化结果:与NS组转相比,重楼皂苷Ⅶ组和紫杉醇组转移瘤Ki-67在细胞核表达阳性率显著降低,但p53在细胞核、Cleaved-caspase 3在细胞浆表达阳性率显著增高。TUNEL检测显示:与NS组相比,重楼皂苷Ⅶ组和紫杉醇组转移瘤CTC-TJH-01细胞凋亡明显增高,红色高亮部分为凋亡的CTC-TJH-01细胞。结论:1、悬浮培养状态可抑制CTC-TJH-01细胞增殖使其处于休眠状态,从而模拟CTCs的体内环境体现其中医“伏毒”特点;2、与常用化疗药物顺铂、紫杉醇相比,金复康对休眠状态CTC-TJH-01细胞敏感,可诱导其发生细胞凋亡;3、与NS组相比,当重楼皂苷Ⅶ达到一定浓度时对休眠状态CTC-TJH-01细胞具有明显的细胞毒性作用,可显著抑制细胞存活率;重楼皂苷Ⅶ与紫杉醇联合对休眠状态CTC-TJH-01细胞不具有协同作用;4、重楼皂苷Ⅶ可将休眠状态的CTC-TJH-01细胞阻滞在G0/G1期,诱导细胞发生凋亡,主要与细胞核损伤有关;5、重楼皂苷Ⅶ干预休眠状态CTC-TJH-01细胞,可激活p53/p21信号通路,调控细胞周期相关蛋白表达,诱导细胞DNA损伤、抑制细胞增殖、阻滞细胞周期,最终诱导细胞凋亡发生;6、在NOD-Scid小鼠体内,休眠状态CTC-TJH-01细胞可导致肺转移瘤形成;重楼皂苷Ⅶ干预可抑制小鼠肺转移瘤形成,主要与细胞DNA损伤、细胞凋亡相关。