丙环唑对核盘菌和指状青霉菌抑制作用的研究

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核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和指状青霉菌(Penicillium digitatum)都属于危害极大的死体营养型植物病原真菌,核盘菌引起油菜、花生、大豆等作物的菌核病,指状青霉菌引起柑橘绿霉病的发生。目前丙环唑在我国仅以混剂形式登记用于油菜菌核病的防治,对柑橘绿霉病的防治尚未登记。本论文主要研究了丙环唑对核盘菌和指状青霉菌的生物活性和对生理方面的影响,对科学利用丙环唑防治这两种病原菌具有一定的理论和实践指导意义。测定了丙环唑对采自安徽省的核盘菌的有效中浓度(EC50)值,建立了核盘菌对丙环唑的相对敏感性基线。2008年(N=75)和2014年(N=75)菌株EC50值的频率分布均符合正态分布,K-S正态检验P值分别为0.119和0.502。2008年和2014年菌株的EC50平均值分别为0.338±0.174μg/mL(SD)和0.315±0.135μg/mL(SD),两年之间无显著差异(P=0.375)。40μg/mL丙环唑对盆栽油菜菌核病保护作用防效为82.4%,80μg/mL的丙环唑对盆栽油菜上菌核病的治疗作用防效为50.7%。光学显微镜观察显示在含0.4μg/mL丙环唑的PDA上生长的菌丝与对照相比顶端分支增多,节间缩短。丙环唑可以显著(P<0.05)提高核盘菌菌丝细胞膜的通透性和菌丝细胞内甘露聚糖的含量。丙环唑对118株指状青霉菌EC50自然对数值的频率分布表明18株菌株已对丙环唑产生抗药性,抗性频率为15.25%,抗性倍数为2.76.5倍。丙环唑相对敏感菌株的EC50平均值为0.104±0.039μg/mL(SD)。丙环唑和抑霉唑对指状青霉菌的EC50值之间相关性显著(R2=0.7537,P<0.001)。200和400μg/mL丙环唑浸果处理后的柑橘储存40 d对绿霉病的防效分别为63.1%和84.3%。40和100μg/mL丙环唑浸果处理显著(P<0.05)降低孢子产量和孢子的致病力。碘化丙啶对孢子染色观察结果显示在含有0.1μg/mL丙环唑的PDA上形成的孢子细胞膜完整性破坏率为25.6%。孢子萌发过程中丙环唑导致孢子细胞内活性氧累积。透射电镜观察发现经丙环唑处理的菌丝细胞壁增厚。与敏感菌株HBWH-22(EC50=0.049μg/mL)和HBWH-26(EC50=0.051μg/mL)相比,抗性菌株JXGZ-2(EC50=0.429μg/mL)和JXGZ-179(EC50=0.675μg/mL)丙环唑作用靶标酶基因CYP51的序列没有发现突变或重复序列插入,但CYP51基因的相对表达量分别是敏感菌株的1.57倍(P=0.029)和1.63倍(P=0.007)。
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