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由铜绿假单胞菌发酵生产的鼠李糖脂是一种表面性能优良的生物表面活性剂,其基于诸多优良特性广泛适用于石油、医药及食品等行业。但是目前由于鼠李糖脂生产成本高、产量低的瓶颈,使其难以工业化应用。其中,原料成本占生产总成本的几乎一半,而生物柴油产业中产生的大量废弃甘油可以作为生产鼠李糖脂的廉价碳源。为了降低鼠李糖脂的生产成本、提高其产量,本课题重点以廉价甘油作为碳源选育高产菌,并对鼠李糖脂的发酵与分离工艺进行研究。首先,采用紫外线作为诱变剂以100s的最佳剂量对实验室保存的铜绿假单胞菌FMO-H-1进行诱变处理,利用甘油.RL培养基对其进行诱导培养,并采用蓝色凝胶平板法、蒽酮-硫酸法以及表面张力法相结合的方法筛选突变菌株,得到一株高产突变菌株ZGR6,其鼠李糖脂产量高达7.96 g/L,比原始菌FMO-H-1提高了约1.33倍,并且其遗传稳定性良好。然后,通过单因素法与正交优化实验考察分析碳源、氮源以及无机盐对突变菌ZGR6发酵生产鼠李糖脂的影响,并研究了鼠李糖脂的发酵动态过程。最终确定优化后的最佳发酵培养基配方(g/L)：甘油22.0、葡萄糖2.0、玉米浆干粉10.0、K2HPO41.0、NaH2PO4 0.6、NaNO3 1.8、MgSO40.5、CaCl20.06、NaCl1.0,其鼠李糖脂产量提高至12.30 g/L,发酵时间缩短至55 h。最后,采用活性炭吸附-酸沉淀法对硫酸铵预处理过的发酵液进行鼠李糖脂的分离提取。探讨了活性炭吸附鼠李糖脂热、动力学规律,研究了pH对活性炭吸附鼠李糖脂的影响及洗脱剂与洗脱时间的选择。结果表明,pH 7.0、吸附温度40～80℃时果壳活性炭的吸附平衡时间为60～140分钟,80℃得到最大吸附量103.5 mg/g；酸沉淀能显著提高吸附量,pH 2.0时果壳活性炭对鼠李糖脂的平衡吸附量提高至310.9 mg/g,一次吸附回收率达75.8%。适宜的洗脱剂为95%乙醇,洗脱时间为2小时,鼠李糖脂一次洗脱回收率为41.8%。通过对鼠李糖脂粗产品进行检测分析,确定该RL粗品的纯度约为90.6%,并且其主要成分为双糖糖脂,其临界胶束浓度CMC值经测定约为45 mg/L。