流感病毒感染所诱导的炎症反应作为动物致死的主要因素,因此建立一种对动物机体炎症反应的检测手段至关重要。CHI3L1作为一种炎性标志物,血清中CHI3L1的检测可为动物机体炎症反应进程的判断提供理论基础,为后续动物疫病检测及诊断提供支持。本试验旨在通过检测CHI3L1这一炎性标志物,建立炎症反应进程诊断方法。对于后续改善及治疗炎症反应具有重要意义。主要结果如下:1.CHI3L1与流感病毒诱导炎症反应关系的验证。体内外感染试验检测CHI3L1表达量。通过ELISA、IF染色检测小鼠感染H1N1(10~6·EID50/30μL)后体内CHI3L1水平变化,q PCR、Western blot检测A549细胞感染H1N1（MOI=10）后CHI3L1表达量变化。结果显示,H1N1感染小鼠和细胞后CHI3L1蛋白均显著升高,证明了CHI3L1与流感病毒感染的炎症程度呈正相关。2.CHI3L1重组质粒的构建、原核表达及纯化。通过NCBI查找并设计CHI3L1引物,PCR扩增目的基因后通过同源重组连接至表达载体p ET-28a。获得重组质粒p ET-CHI3L1并进行菌落PCR鉴定。鉴定成功后的p ET-CHI3L1重组质粒转化至表达感受态Rosetta,经IPTG诱导发现,该蛋白为包涵体表达。进一步用8 M饱和尿素溶液对该蛋白进行变性,使用His-tag亲和介质纯化CHI3L1目的蛋白,使用梯度尿素溶液对蛋白进行透析复性。经Western blot验证,目的蛋白大小约40 k D,蛋白浓度约为1 ng/μL。3.CHI3L1多克隆抗体的制备及纯化。利用CHI3L1蛋白对家兔免疫5次（2周/次）,采集血清。Western blot结果显示,兔血清中存在CHI3L1抗体,且蛋白大小为40 k D。ELISA检测抗体效价为1:6400。进一步使用偶联CHI3L1蛋白的CNBr-activated Bestarose 4FF亲和介质对CHI3L1多克隆抗体进行分离纯化,经SDS-PAGE及ELISA验证得到CHI3L1多克隆抗体。4.间接ELISA检测方法的建立及应用。使用纯化的CHI3L1多克隆抗体建立间接ELISA检测方法及双抗夹心胶体金检测方法。间接ELISA条件优化结果为:抗原最佳包被条件为400 ng/μL,37℃孵育2 h;最佳封闭条件为2%BSA,37℃孵育2 h;最佳一抗条件为1:200稀释,37℃孵育1 h;最佳二抗条件为1:4000稀释,37℃孵育2 h;最佳显色条件为室温显色15 min。结果显示:该方法可检测出感染H1N1小鼠以及感染新城疫病毒家禽血清中CHI3L1蛋白均显著升高（P＜0.05）,也可检测出CHI3L1稳转细胞系中CHI3L1蛋白表达显著升高。综上所述,本研究通过探明CHI3L1与流感病毒诱导炎症反应的关系,原核表达CHI3L1蛋白并制备多克隆抗体,建立了CHI3L1间接ELISA检测方法,均可用于检测动物血清中CHI3L1蛋白水平,并且间接ELISA方法还可用于检测细胞中CHI3L1蛋白水平。研究结果为探明流感病毒与CHI3L1的互作关系提供理论依据,也为病毒病感染的诊断提供检测方法。