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目的:运用HPLC分别建立奥沙利铂(L-OHP)体外、体内测定方法,以研究L-OHP用于消化系统肿瘤患者术中腹腔热灌注的安全性考察;测定肿瘤患者两种给药方案下静脉输注不同剂量时L-OHP体内药代动力学参数,监测体内血浆蛋白结合铂的变化情况。方法:1.按照高(200mg/m2)、低(130mg/m2)两种给药剂量,于热灌注温度下(42℃)考察L-OHP的稳定性;考察不同温度下(25℃和42℃)L-OHP与普鲁卡因、地塞米松(DXM)、利多卡因的配伍稳定性;考察患者灌注药物24h内变化情况。体外测定条件:色谱柱为Kromasil C-18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(7:93),检测波长:249nm,流速:1.0ml/min,进样量:20μl,柱温:室温。2.建立HPLC-UV检测方法,以氯化镍(NiCl2)为内标,DDTC为衍生剂,使用超速离心法分离血浆中的游离铂,并测定游离铂的浓度,使用改良酸消化法消解血浆中的结合铂,并测定血浆总铂的浓度,计算结合铂的浓度。选择符合条件分别使用两种不同剂量(85mg/m2和130mg/m2)进行化疗的消化系统肿瘤患者各5名,静脉输注2h结束后,于0h,0.5h,1h,2h,4h,8h,16h,24和48h采全血,测定血浆游离铂和总铂浓度,绘制药时曲线,计算两组药代动力学参数及血浆蛋白结合参数。体内测定条件为:色谱柱:Hypersil-ODS2(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(75:25);检测波长:254nm;流速:0.8ml/min;柱温:室温。结果:1.L-OHP在9.432μg/ml-94.32μg/ml范围内药物浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=7);平均回收率=100.30%,RSD=0.89%。L-OHP于42℃下4h内含量无明显变化;与地塞米松配伍时,在25℃、42℃条件下8h含量无明显变化;与普鲁卡因混合在25℃时2h内含量无变化,4h后含量明显下降,42℃时1h含量降低>5%;与利多卡因混合后即刻产生白色絮状沉淀:以130mg/m2的给药剂量,检测腹腔液药物浓度8h下降一半,24h趋近于0。2.L-OHP在0.1μg/ml-8μg/ml范围内衍生物浓度与峰面积呈良好的线性关系,Y=0.1101X-0.0045(r=0.9991,n=7);游离铂相对回收率=91.83%,RSD=9.60%,血浆总铂相对回收率=91.79%,RSD=9.94%,最低检测限为0.03μg/ml。两种给药剂量下,48h内药物血浆中均表现为较高血浆蛋白结合率,并随时间延长呈上升趋势,低剂量组较高剂量组更为明显;两种给药剂量下,单次给药测定L-OHP的药代动力学参数,游离铂组间α、V1、AUC(0-t)、K10、MRT0-t间有统计学差异;血浆总铂组间α、β、t1/2β、V1、AUC0-t、AUC0-∞、K21、MRT0-t、MRT(0-∞)间有统计学差异。结论:1.本研究所建立体外、体内L-OHP测定方法准确、快速、便捷。2.L-OHP用于腹腔热灌注时配伍地塞米松适宜;与普鲁卡因配伍可影响L-OHP的稳定性;L-OHP不可与利多卡因混合使用;130mg/m2的剂量用于腹腔灌注是安全的,其有效性尚待进一步研究。3.L-OHP不同剂量用于治疗消化系统肿瘤时表现出较高的血浆蛋白结合率,证明该类抗肿瘤药在药代动力学及作用机理等方面的特殊性;4.L-OHP药代动力学参数与剂量相关,单次给药130mg/m2更可充分发挥药物作用。