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目的:为了研究黄芩素对人肺癌细胞A549耐顺铂株(A549/CDDP)的顺铂细胞毒性的影响并探讨其可能的作用机制。方法:1.MTT法测定肿瘤细胞的增殖能力。2.采用Annexin V/PI双染法检测A549/CDDP的细胞凋亡情况。3.Transwell法检测A549和A549/CDDP细胞侵袭、迁移能力的变化。4.采用westen blot法测定各蛋白E-cadherin、Vimentin、p-Akt、Akt、p65、IκBα、c-IAP1,c-IAP2,survivin和Bcl-x L的表达水平。5.si RNA沉默A549/CDDP细胞中p65的表达,降低NF-κB的活性。6.采用肿瘤动物模型观察黄芩素对顺铂细胞毒性的影响。7.统计学:本实验所有数据均使用SPSS 16.0软件进行q检验。结果:1.黄芩素通过诱导细胞凋亡增强顺铂的细胞毒性作用黄芩素浓度为200μM时对A549/CDDP细胞有抑制作用,选取100μM黄芩素与顺铂合用后测细胞存活率发现,黄芩素能够明显增强顺铂对A549/CDDP的细胞毒性。Annexin V/PI双染法检测后发现:黄芩素与顺铂合用后能够明显增加细胞的凋亡。2.动物模型中,黄芩素可增强顺铂细胞毒性肿瘤动物模型建立后,我们的结果发现,与单用顺铂或者黄芩素组相比较,黄芩素与顺铂联合用药能够显著降低裸鼠体内肿瘤细胞的增长。3.A549/CDDP细胞发生了EMT结果显示:与A549细胞相比,A549/CDDP细胞形态发生了EMT转变,E-cadherin表达明显降低,Vimentin表达显著上升,A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力明显提高。说明A549耐顺铂株发生了EMT。4.黄芩素可逆转A549/CDDP细胞的EMT用黄芩素处理A549/CDDP细胞后,我们的结果发现:黄芩素可显著降低A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力,并且能上调A549/CDDP细胞中E-cadherin的表达,降低Vimentin的蛋白表达水平,逆转A549/CDDP细胞EMT。5.黄芩素逆转A549/CDDP细胞EMT与PI3K/Akt信号通路有关实验结果显示:与A549细胞相比,A549/CDDP细胞中p-Akt的表达明显增强,使用LY294002处理A549/CDDP后可抑制p-Akt的表达,阻断PI3K/Akt信号通路,且能上调E-cadherin的表达,降低Vimentin的表达,降低A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力,并增强顺铂的细胞毒性。而黄芩素随着浓度的增加可逐渐降低p-Akt的表达水平,这些结果说明在A549/CDDP细胞中黄芩素可以抑制PI3K/Akt信号通路的活性,从而逆转EMT,增强顺铂的细胞毒性作用。6.黄芩素逆转EMT、增强顺铂细胞毒性与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关实验结果证明:与A549细胞相比,A549/CDDP细胞中p65表达增高,IκBα的表达下降。si RNA沉默p65蛋白表达后发现,E-cadherin的表达增加而Vimentin表达降低,且细胞的侵袭、迁移能力降低,MTT法测得顺铂的细胞毒性增加,说明降低NF-κB活性可逆转EMT。而western blot显示黄芩素可降低p65的表达水平同时上调IκBα的表达水平,而LY294002阻断信号通路后也可降低NF-κB的活性。因此我们得出黄芩素抑制EMT,增强顺铂的细胞毒性的能力可能是通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路来实现的。7.黄芩素能够抑制NF-κB下游靶蛋白的活性western blot检测结果显示:黄芩素能够明显降低NF-κB所调控的靶蛋白包括抗凋亡蛋白c-IAP1,c-IAP2,survivin和Bcl-x L的表达。结论:黄芩素能够在体内及体外增加A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能是通过阻断细胞内的PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制EMT,抑制抗凋亡基因的表达。