SELDI-TOF-MS技术对肝癌裸鼠移植瘤模型体内微量蛋白谱分析

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目的:采用Bel-7402人肝癌细胞悬液接种于3周龄BALB/C裸鼠的左肩背部皮下,构建人肝癌裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤大小与生长时间的相关性,利用SELDI-TOF-MS技术对造模成功后不同时段的裸鼠体内差异蛋白的表达进行检测,分析这些微量蛋白的表达规律,旨在寻找新的原发性肝癌早期诊断标志物。方法:将Bel-7402人肝癌细胞复苏,传代培养3-5次后选择对数生长期细胞配置成浓度为1×107个/ml的癌细胞悬液,皮下接种于3组实验组裸鼠左肩背部,剂量为0.1ml/只,对照组裸鼠左肩背部皮下接种相同剂量无血清培养基。密切观察实验动物的肿瘤生长情况,每两周测量并记录裸鼠肿块的体积。所有裸鼠均采用摘眼球取血法,对照组和3组实验组分别在造模成功后20d、40d、60d取血0.5ml/只,然后处死裸鼠,并分离肿瘤组织送病理科进行组织切片检查。裸鼠血液标本应立即于4℃离心5min,转速为3000rpm,分离样本血清并分装编号,冻存于-80℃备用。应用SELDI-TOF-MS技术检测分析裸鼠血清标本中的微量蛋白,利用Ciphergen ProteinChip3.0和Ciphergen Biomaker Wizard3.1软件对得到的蛋白质谱图进行数据采集和分析,筛选出与肝癌相关的差异表达蛋白,并在蛋白数据库中进行检索比对。结果:裸鼠接种癌细胞悬液15-20天长出肿块,成瘤率100%。分析筛选出与肝癌相关并呈规律性变化的差异表达蛋白(P<0.01)5个,相对分子质量分别为2016Da、3309Da、3442Da、3745Da、2747Da,其中前四种微量蛋白在实验组裸鼠体内表达逐渐增强,最后一种微量蛋白在实验组裸鼠体内表达逐渐减弱。在Swiss-Prot蛋白数据库中对这5组微量蛋白进行检索和鉴定,初步结果为Protein2A、Potassium channel toxin alpha-KTx20.1、 Serine protease inhibitor2、Neurotoxin P2和LeuA leader peptide。结论:1.采用Bel-7402人肝癌细胞悬液皮下接种裸鼠构建动物肿瘤模型的方法操作简便、用时较短、成瘤率高,为肝癌的科学研究提供了有效的方法。2.利用SELDI-TOF-MS技术检测和筛选肝癌裸鼠移植瘤模型血清中的差异表达蛋白,可能发现新的肝癌诊断的血清标志物,为肝癌早期诊断研究开辟了新的途径。
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