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以绿色荧光蛋白(GFP,Green Fluorescent Protein)的荧光团HOBDI和传统荧光染料氟硼吡咯(BODIPY)作为母体,设计、合成了三种新型的有机小分子荧光探针,利用聚集诱导荧光增强效应(AIEE)和荧光共振能量转移(FRET)实现对细胞内微环境和酪氨酸酶的检测。(1)基于绿色荧光蛋白的荧光团HOBDI设计、合成了一种新型的有机小分子荧光探针,并初步测试了其光谱性能。由于探针分子不是刚性的共轭平面结构,并且硝基苯基和咪唑啉酮之间碳碳键可以发生转动,因此探针Lyso-3具有聚集诱导荧光增强型荧光团的特性,即基于抑制分子内转子转动(Restriction of intramolecular rotations,RIR)的机理可以设计成AIE探针。在溶液中由于碳碳键的转动,激发状态下以非辐射方式释放能量较多,该荧光团的荧光较弱,但是在固体状态下,碳碳键的转动受到抑制,荧光团从激发态跃迁回基态过程中,非辐射方式释放能量减少,从而荧光增强。(2)在课题1的研究基础上,设计、合成了一种新型的高选择性溶酶体粘度探针Lys-V,用于实时检测溶酶体的粘度变化。利用HOBDI的对羟基苯基和咪唑啉酮环之间的碳碳键可以发生转动,发展一种基于绿色荧光蛋白的荧光团为母体的有机小分子荧光探针Lys-V,实现了对溶酶体粘度变化的检测。HOBDI具有聚集诱导荧光(AIE)类荧光团的性质,当溶液粘度增大时,探针的荧光随之增强,荧光强度与粘度之间有良好的线性关系。HOBDI通过双键连接对羟基苯基,增大探针Lys-V的共轭结构,荧光波长发生红移。两端碱性的吗啉环不仅增强探针的水溶性,同时也可以被用作溶酶体靶向基团。在细胞凋亡过程中,溶酶体粘度增大,探针的荧光信号也随之增强,为溶酶体功能异常相关疾病研究领域提供了一种新的研究工具。(3)以氟硼吡咯和香豆素为母体,基于FRET机理设计了一种新型的酪氨酸酶探针。探针Tyr Probe的香豆素紫外光激发后,所产生的荧光用以激发氟硼吡咯,产生橙色荧光;探针Tyr Probe与溶液中O2经酪氨酸酶催化,氟硼吡咯荧光团上的对羟基苯基被氧化为苯醌,苯醌作为供电子基团(donor,D),氟硼吡咯作为电子接受基团(acceptor,A),两者之间发生a-PET效应,氟硼吡咯的荧光被猝灭,此时探针发射香豆素的荧光。两种波长的荧光可以用于比值型定量检测酪氨酸酶。