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[目的]
建立转染人TSLC1基因的人食管癌Eca109细胞稳定表达株和探讨TSLC1基因在调节食管癌细胞在裸鼠体内生长和浸润中的作用,为进一步明确TSLC1基因对食管癌的作用机制奠定基础。
[方法]
1.转染人TSLC1基因的人食管癌Eca109细胞稳定表达株的建立
(1)pIRES2-EGFP-TSLC1重组质粒转染人食管癌Eca109细胞株;
(2)转染了TSLC1基因的人食管癌Eca109细胞株的阳性筛选与克隆。
2.TSLC1基因对人食管癌Eca109细胞裸鼠移植瘤生长增殖的影响
(1)裸鼠皮下成瘤:实验组、对照组及空白组细胞分别于裸鼠背部皮下注射以形成皮下肿瘤,每组注射10只。
(2)裸鼠尾静脉注射形成内脏转移瘤:实验组、对照组及空白组细胞分别于裸鼠尾静脉注射以形成内脏转移瘤,每组注射10只。
3.指标检测
①观察三组细胞形态学改变。
②TSLC1在细胞内表达情况:RT-PCK检测。
③小鼠一般情况观察。
④肿瘤生长变化:每隔一天用游标卡尺测量裸鼠皮下肿瘤最大的长径、宽径及厚径一次,三径互相垂直,记录体积变化。
⑤抑瘤率:抑瘤率=空白组肿瘤平均体积-实验组肿瘤平均体积/空白组肿瘤平均体积x100%。
⑥病理学检查:裸鼠皮下及肝、肺脏内成瘤大小,浸润范围,肿瘤组织分化差异,肿瘤血管形成的差异等。
[结果]
1.TSLC1在细胞内表达情况
阳性筛选后通过RT-PCR测定实验组细胞中TSLC1基因的表达,结果显示实验组细胞存在TSLC1基因表达。
2.细胞形态变化
实验组细胞呈圆形或椭圆形,聚集成团,细胞团之间疏散,细胞状态较差;对照组和空白组细胞呈多边形或梭形,细胞之间交织紧密,细胞生长旺盛。
3.小鼠一般情况
实验组裸鼠生活状态始终正常、食欲旺盛、行动自如。空白组和对照组裸鼠逐渐出现食欲不振、精神萎靡、活动减少。
4.肿瘤生长变化
空白组裸鼠于接种后5天开始出现肿瘤,肿瘤的平均体积为272.42mm3。对照组裸鼠于接种后5天开始出现肿瘤,肿瘤的平均体积为256.34mm3。实验组裸鼠于接种后10天开始出现肿瘤,肿瘤的平均体积为162.07mm3。
5.抑瘤率
抑瘤率:抑瘤率=空白组肿瘤平均体积-实验组肿瘤平均体积/空白组肿瘤平均体积x100%。抑瘤率=272.42.162.07/272.42x100%=40.51%。
6.病理学检查
(1)皮下成瘤:实验组肿瘤大小及浸润范围均小于空白组和对照组,肿瘤分化稍好于空白组和对照组,肿瘤血管形成较空白组和对照组差。空白组和对照组之间无明显差异。
(2)内脏成瘤:三组裸鼠内脏均无形成明确的肿瘤,尚无法比较。
[结论]
成功建立人TSLC1基因的人食管癌Eca109细胞稳定表达株,TSLC1基因能够抑制人食管癌Eca109细胞在裸鼠体内的生长、浸润以及肿瘤血管形成。