酸性α-淀粉酶因其在酸性条件下能够水解淀粉,可广泛的应用于发酵、饲料、食品和生物制药等各个领域。本实验室前期筛选得到一株酸性α-淀粉酶高产菌株B-5,其分泌的淀粉酶的最适温度为70℃,最适pH为5.0。本实验通过对B-5菌株形态特征,生理生化特性和16S rDNA同源性的研究,将B-5菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。根据已报道的α-淀粉酶基因(α-AMY)序列的保守区域设计引物,从解淀粉芽孢杆菌B-5基因组中扩增出α-淀粉酶基因amy,将amy纯化后克隆到pMD-19载体上测序,结果表明amy基因为一个完整的ORF,长为1980bp。将去除信号肽的α-淀粉酶基因片段定向克隆到表达载体pET21a上,得到重组质粒pET21a-amy,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,Amy-E蛋白的相对分子量为66 kDa。经分离纯化得到了重组的α-淀粉酶Amy-E蛋白,其最适温度为70℃,最适pH为5.0～6.2。分别以1%直连淀粉、支链淀粉、茁霉多糖为底物,测定了重组的α-淀粉酶的底物特异性,结果表明支链淀粉为重组α-淀粉酶的最适底物,直链淀粉次之,而重组的α-淀粉酶不作用于茁霉多糖。以直连淀粉、支链淀粉为底物测定重组α-淀粉酶的动力学性质,Km(直链淀粉)、Km(支链淀粉)分别为2.58,0.94;Vmax(直链淀粉)、Vmax(支链淀粉)分别为11.98,72.46。硅胶板薄层层析(TLC)分析表明,重组的α-淀粉酶将直链淀粉,支链淀粉和可溶性淀粉最终分解为葡萄糖和麦芽糖。