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研究目的: 观察高浓度皮质酮对原代培养的海马神经细胞活性及学习记忆相关基因GR、Arc、Zif268、Syn1、Gabra5表达的影响，并初步观察Syn1基因启动子CpG岛甲基化，以及DNMT1酶蛋白表达的变化。同时还观察甘露三糖和黄芪甲苷对皮质酮损伤海马神经细胞上述基因表达、CpG岛甲基化状态及DNMT1蛋白表达水平的影响。 研究方法: 原代培养新生24h SD大鼠海马神经细胞，通过CCK8实验、FDA/PI双荧光染色法观察不同浓度皮质酮作用不同时间对海马神经细胞活性的影响，从而确定最佳皮质酮作用浓度和时间以制备皮质酮损伤海马神经细胞病理模型。利用实时定量PCR及western blot方法检测皮质酮对海马神经细胞GR、Arc、Zif268、Syn1、Gabra5基因表达的影响。通过NCBI获得Syn1基因序列，在线预测启动子并分析CpG岛，针对CpG岛序列设计BSP引物、利用亚硫酸氢盐测序法分析高浓度皮质酮、GR拮抗剂RU486以及甲基转移酶抑制剂Decitabine对Syn1基因启动子CpG岛甲基化的影响，同时，以实时定量PCR及western blot检测皮质酮损伤后海马神经细胞DNMT1的表达水平变化，以分析皮质酮对Syn1基因表达的影响与基因启动子CpG岛甲基化改变的关系，及对DNMT1表达的调节。同时，观察甘露三糖和黄芪甲苷对皮质酮损伤海马神经细胞上述各项指标的影响。 研究结果: 1.与对照组比较，皮质酮能够呈现时间剂量依赖性的降低神经细胞活性，0.4mM皮质酮作用24小时后多数神经细胞突起变细、变短，荧光染色后观察到少部分细胞死亡，CCK8数据显示细胞活力较对照组下降42.2％，因此0.4mM皮质酮作用24小时可获得符合本研究要求的皮质酮损伤海马神经细胞病理模型; 2.qRT-PCR及WB结果显示0.4mM皮质酮能够下调海马神经细胞GR、Arc、Zif268、Syn1 mRNA及蛋白表达，上调Gabra5 mRNA及蛋白表达;BSP结果分析显示皮质酮能够提高Syn1基因启动子CpG岛甲基化水平，而GR拮抗剂RU486及DNMT抑制剂Decitabine能降低皮质酮损伤细胞Syn1基因启动子CpG岛甲基化水平;Decitabine可提高损伤细胞Syn1基因的表达;皮质酮作用6小时及12小时神经细胞DNMT1表达显著升高; 3.0.1mM，0.2mM和0.4mM甘露三糖和0.1μ M、1μM、10μM黄芪甲苷预处理可以显著增加皮质酮损伤细胞的活力;也均能不同程度地提高海马神经元的存活率;BSP分析显示甘露三糖组对皮质酮损伤细胞Syn1的甲基化水平无差异，而黄芪甲苷、黄芪甲苷与甘露三糖合用组细胞Syn1的甲基化水平较模型组显著下降;qRT-PCR及WB显示甘露三糖组、黄芪甲苷、黄芪甲苷与甘露三糖合用组细胞DNMT1蛋白的表达与模型组细胞无显著差别。 研究结论: 0.4mM皮质酮能够降低海马神经细胞活性，制作海马神经细胞病理模型，并下调学习记忆相关基因GR、Arc、Zif268、Syn1的表达，上调GABRA5基因的表达;0.4mM皮质酮可通过GR的介导，提高Syn1基因启动子甲基化水平而导致Syn1基因低表达;0.4mM皮质酮可上调参与DNA甲基化修饰过程的酶蛋白DNMT1的表达;甘露三糖和黄芪甲苷及两药合用可提高模型细胞的活性，改善损伤细胞GR、Arc、Zif268、Syn1基因的表达;黄芪甲苷及两药合用可降低模型细胞Syn1基因启动子甲基化水平而上调基因表达;黄芪甲苷、甘露三糖及两药合用对海马神经细胞DNMT1蛋白表达均无显著影响。