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目的:通过制备马钱子碱免疫纳米微粒,观察马钱子碱免疫纳米微粒对人肝癌细胞生长、侵袭和转移作用的影响,揭示马钱子碱免疫纳米微粒影响肝癌细胞生长、侵袭和转移生物学行为的作用机制,为肝癌治疗及复发转移的防治提供理论依据和新的治疗方法。
方法:采用阴离子聚合和化学改性技术制备羧基化聚乙二醇和聚乳酸嵌段共聚物纳米材料,超声乳化技术制备马钱子碱纳米微粒,通过化学偶联技术制备马钱子碱免疫纳米微粒。依据实验要求分为8组:5-FU组、RPMI-1640组、羧基化聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物组(COOH-PEG-PLA)、抗人AFP单克隆抗体组(AFPMcAb)、抗人AFPMcAb-PEG-PLA纳米微粒组、马钱子碱组、马钱子碱纳米微粒组和马钱子碱免疫纳米微粒组;体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,通过MTT比色法、基质黏附实验和Transwell小室实验,分别测定马钱子碱、马钱子碱纳米微粒与马钱子碱免疫纳米微粒对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用、黏附、侵袭与运动能力的影响。
结果:1)MTT实验:阴性对照各组对肝癌细胞SMMC-7721的生长均无明显抑制作用,且阴性各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。5-FU组和实验各组对肝癌细胞SMMC-7721生长具有明显抑制作用,且随药物浓度的增加抑制作用呈递增趋势,具有浓度依赖性,实验各组间抑制作用比较差异具有统计学意义(F=5.719,P<0.01)。与马钱子碱和马钱子碱纳米微粒相比,马钱子碱免疫纳米微粒对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用与5-FU接近,IC50相差最小(5-FU组IC50为16.7μg/ml;马钱子碱免疫纳米微粒组IC50为28.2μg/ml)。2)基质黏附与Transwell小室实验:阴性各组均不能有效抑制人肝癌细胞SMMC-7721的基质黏附和侵袭迁徙作用,随着药物剂量的增长,基质黏附率、侵袭率和迁徙率均无明显变化(P>0.05)。5-FU组、马钱子碱、马钱子碱纳米微粒和马钱子碱免疫纳米微粒组均有效抑制人肝癌细胞SMMC-7721的基质黏附和侵袭迁徙作用,且随药物剂量的增长,基质黏附率、侵袭率和迁徙率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);马钱子碱免疫纳米微粒显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721基质黏附、侵袭和迁徙,与5-FU组、马钱子碱组和马钱子碱纳米微粒组相比,黏附率、侵袭率和迁徙率组间差异具有统计学意义(F=125.194,57.238,51.237,P<0.01)。
结论:1)马钱子碱免疫纳米微粒能特异性地与肝癌细胞结合,靶向性强,局部药物浓度高,缓释性好;2)马钱子碱免疫纳米微粒具有抑制人肝癌细胞生长增殖能力,呈时效和量效关系;3)马钱子碱免疫纳米微粒能够有效抑制人肝癌细胞细胞黏附、侵袭及迁徙的生物学行为,作用强于马钱子碱和马钱子碱纳米微粒;4)马钱子碱免疫纳米微粒是一种具有潜在应用前景的抗肿瘤药物,为肝细胞癌的治疗及侵袭转移的防治提供新的治疗方法。