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目的:观察电针对褪黑素(melatonin, MT)及其受体(melatonin receptor,MR)昼夜节律的调节作用,探讨电针调控失眠大鼠昼夜节律的机理,为针灸治疗失眠提供实验室依据。
方法:120只Wistar雄性大鼠,随机分为正常组(n=30)、模型组(PCPA失眠模型)(para-hlorophenylalanine, PCPA)(n=30)、电针穴位组(n=30)、电针非穴位组(n=30)。正常组:在模型组、电针穴位组、电针非穴位组造模的同时腹腔注射弱碱性生理盐水1ml/100g,但无任何干预措施。模型组:PCPA用弱碱性生理盐水配置成混悬液(300mg/100g),腹腔注射混悬液1ml/100g,连续注射2日,按照电针穴位组和电针非穴位组的干预时间及方法只捆绑但不加电针。电针穴位组:先行电极植入术后恢复7天,于第8天上午8:00-9:00与模型组、电针非穴位组一起PCPA造模。造模后,根据实验动物针灸穴位图谱(全国针灸学会实验针灸研究会制定),选取照海(K6,后肢内踝下1mm)、申脉穴(B62,后肢外踝正下方凹陷中),选用华佗牌无菌针灸针(0.25x18mm),施以频率为2Hz,电压为6伏特的疏密波电针(electroacuPuncture, EA)干预,15min/日,连续治疗5天。造模前后及治疗后分别记录大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)。电针非穴位组:PCPA造模,取非经穴部位(照海、申脉三点钟方向旁开2-3mm的非经非穴处)施以电针干预,电针参数同电针穴位组。
结束后分别于0:00、8:00、16:00取腹主动脉血,ELISA(enzymelinked immunosorbentassy, ELISA)法检测血清褪黑素。取下丘脑、垂体及肾上腺组织制成石蜡切片,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察组织的病理改变;采用免疫组化(immuno-histochemistry, IHC)法,观察褪黑素受体MT1、MT2在组织中的阳性表达;采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction polymerase chain reaction, FQ-PCR)法检测下丘脑、垂体、肾上腺MR的mRNA(messenger ribonucleic acid, mRNA)表达。结果:与正常组相比较,造模后第二天大鼠EEG显示大鼠觉醒时间大幅度增加(P<0.001),睡眠时间显著减少(P<0.001),与造模前相比较,有显著性差异。电针穴位组经电针干预之后,大鼠睡眠时间增加(P<0.001),与造模后相比较,有显著性差异;ELISA检测血清褪黑素显示,电针穴位组大鼠在8:00、16:00的血清褪黑素与模型组相比虽无统计学差异;但电针穴位组大鼠在0:00的血清褪黑素浓度升高(P<0.05),与模型组相比较,差异有统计学意义;PCR法检测下丘脑、垂体、肾上腺MR的mRNA表达结果显示:电针穴位组大鼠在三个组织中MR的mRNA表达与模型组相比均减少(P<0.05),差异均有统计学意义。下丘脑、垂体、肾上腺组织病理评分结果显示:电针穴位组大鼠褪黑素受体MT1在下丘脑、垂体、肾上腺上的表达与模型组相比显著减少(P<0.05),差异有统计学意义,MT2在下丘脑、垂体、肾上腺上的表达与模型组相比显著减少(P<0.05),差异有统计学意义。
结论:
1、电针双侧“照海”、“申脉”干预失眠大鼠可改善睡眠状态,重置生物节律,且具有腧穴相对特异性。
2、电针可通过上调褪黑素,下调MR表达来调节失眠大鼠的昼夜节律,缓解失眠症状,这可能是电针治疗失眠的主要途径之一。