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目的通过DNCB诱导和激发来建立小鼠AD模型,研究DINP对DNCB诱导的BALB/c小鼠AD的影响及机制。方法应用DNCB反复背部致敏和耳部激发可建立小鼠特应性皮炎模型。使用数显卡尺测量小鼠耳厚度,计算小鼠耳厚度差。通过HE染色观察小鼠皮损部位的皮肤结构改变和炎症细胞浸润。通过甲苯胺蓝染色观察小鼠皮损部位的肥大细胞数目和脱颗粒。通过免疫组化来衡量小鼠皮损部位TSLP的表达状况。使用ELISA法测量小鼠血清中IgE、IL-4、IFN-γ、IL-31的水平。结果1.小鼠体重比较:实验前小鼠体重为13.598±0.928g,差异无统计学意义(F=0.041,P=0.997);实验后小鼠体重为control组(19.638±1.003g),model组(19.450±0.845g),4(19.550±0.996g)、40(19.400±0.953g)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(19.088±0.849g),五组差异无统计学意义(F=0.405,P=0.804)。可认为DINP暴露对小鼠体重无显著性影响。2.耳部变化比较:control组右耳无变化。DNCB组和4 mg/kg/day DINP+DNCB组右耳发红。40 mg/kg/day DINP+DNCB组和400 mg/kg/day DINP+DNCB组右耳出现明显的干燥、脱屑、浆痂,周围毛发脱落。3.耳厚度差比较:control组(0.001±0.025mm),DNCB组(0.171±0.038mm),4(0.203±0.035mm)、40(0.300±0.056mm)、400 mg/kg/day DINP+DNCB组(0.363±0.048mm)五组差异有统计学意义(F=87.633,P(27)0.001)。可认为五组小鼠耳厚度差不全相同。两两比较结果显示,DINP的暴露导致小鼠耳厚度差增加,且呈剂量依赖性。4.脾指数的比较:control组(3.660±0.256mg/10g),DNCB组(3.916±0.483mg/10g),4(3.971±0.353mg/10g)、40(4.337±0.482mg/10g)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(4.387±0.435 mg/10g)五组差异有统计学意义(F=4.401,P=0.005)。可认为五组小鼠脾指数不全相同。两两比较结果显示,400 mg/kg/day的DINP暴露增加小鼠脾指数,4和40mg/kg/day的DINP暴露对小鼠脾指数无显著性影响。5.耳部HE染色比较:control组无明显改变。DNCB组可见少量炎细胞浸润。随着DINP暴露的增加,炎细胞浸润加剧。6.耳部甲苯胺蓝染色比较:肥大细胞总数和脱颗粒数分别为:control组(10.417±2.742,2.375±0.667)、DNCB组(16.875±3.673,3.458±0.689)、4(16.167±4.612,2.458±0.796)、40(25.792±4.102,4.667±0.777)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(35.417±5.418,6.917±1.257)。对于肥大细胞总数,五组差异有统计学意义(F=43.316,P(27)0.001)。可认为五组肥大细胞总数不全相同。两两比较结果显示,4mg/kg/day的DINP暴露使肥大细胞总数略有降低,但无显著性影响,而40和400mg/kg/day的DINP暴露使肥大细胞总数增加。对于肥大细胞脱颗粒数,五组差异有统计学意义(F=38.044,P(27)0.001)。可认为五组肥大细胞脱颗粒数不全相同。两两比较结果显示,4mg/kg/day的DINP暴露使肥大细胞脱颗粒数明显减少,而40、400mg/kg/day的DINP暴露使肥大细胞脱颗粒数显著增加。7.耳部TSLP累计光密度值比较:control组(280.292±86.57)、DNCB组(1515.625±364.113)、4(1129.500±135.550)、40(5042.542±810.476)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(5974.417±751.653)五组差异有统计学意义(χ2=35.488,P(27)0.001)。可认为五组TSLP不全相同。两两比较结果显示,4mg/kg/day DINP暴露组TSLP表达减少,40和400 mg/kg/day DINP的暴露使TSLP表达增加。8.血清Ig E比较:control组(2.455±0.228U/ml)、DNCB组(3.592±0.375U/ml)、4(3.500±0.364U/ml)、40(4.160±0.390U/ml)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(4.412±0.423 U/ml)五组差异有统计学意义(F=34.876,P(27)0.001)。可认为五组血清Ig E不全相同。两两比较结果显示,4mg/kg/day的DINP暴露未导致血清Ig E的明显变化,而40和400 mg/kg/day的DINP暴露导致Ig E的明显增加。9.血清IL-4比较:control组(7.363±0.690 ng/L)、DNCB组(8.243±0.940ng/L)、4(8.334±0.859 ng/L)、40(9.081±0.869 ng/L)、400 mg/kg/day DINP+DNCB组(9.429±0.841 ng/L)五组差异有统计学意义(F=7.266,P(27)0.001)。可认为五组血清IL-4不全相同。两两比较结果显示,4、40、400mg/kg/day DINP导致IL-4含量升高。10.血清IFN-γ比较:control组(183.134±8.969pg/ml),DNCB组(175.481±13.383pg/ml),4(175.153±13.039pg/ml)、40(170.051±12.180pg/ml)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(167.892±12.632pg/ml)五组差异无统计学意义(F=1.888,P=0.134)。尚不能认为五组血清IFN-γ含量不同。11.血清IFN-γ/IL-4比较:control组(24.970±1.305),DNCB组(21.421±1.692),4(21.175±2.327)、40(18.846±1.951)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(17.885±1.560)五组差异有统计学意义(χ2=26.045,P(27)0.001)。可认为五组比值不全相同。两两比较结果显示,4 mg/kg/day DINP使IFN-γ/IL-4比值升高,但无显著性;40和400 mg/kg/day的DINP暴露导致比值显著降低。12.血清IL-31比较:control组(8.737±0.571ng/L),DNCB组(9.236±0.857ng/L),4(9.509±0.648ng/L)、40(10.880±1.243ng/L)、400mg/kg/day DINP+DNCB组(11.891±0.919ng/L)五组差异有统计学意义(F=17.455,P(27)0.001)。可认为五组血清IL-31不全相同。两两比较结果显示,40和400 mg/kg/day的DINP暴露组导致血清IL-31明显升高。结论1.应用DNCB反复背部致敏和耳部激发可建立小鼠特应性皮炎模型。2.40和400 mg/kg/day的DINP暴露会加重DNCB诱导的小鼠皮炎。3.Th1/Th2失衡是DINP加重DNCB诱导小鼠皮炎的重要免疫学机制。