整合子作为一种可移动遗传元件,在细菌耐药基因的水平传播和多重耐药菌的出现中起着重要作用。近年来,南美白对虾等水产品中I型和Ⅱ型整合子屡有检出。其中,Ⅱ型整合子因其有别于I型整合子的特殊结构和仍未清晰的传播机制而日益受到关注。然而,Ⅱ型整合子在相关宿主菌中的适应性代价不明,严重制约了对其传播机制的理解。因此,本课题以南美白对虾源携带Ⅱ型整合子的多重耐药大肠杆菌为材料,通过基因工程菌构建、菌株间的竞争试验和流式细胞术等方法研究了Ⅱ型整合子中各重要元件在大肠杆菌中的体外适应性代价,研究发现:（1）从浙江省某农贸市场共采集450份南美白对虾样品,分离到181株大肠杆菌,其中13株携带Ⅱ型整合子,阳性率为7.18%。携带Ⅱ型整合子的分离株均为多重耐药菌株,且多重耐药系数均大于0.2,耐药模式多样化。对13个Ⅱ型整合子的基因结构进行分析,发现Ⅱ型整合酶均为功能缺陷型（int I2*）,12个含典型Ⅱ型整合子基因盒阵列dfr A1-sat2-aad A1,1个含非典型基因盒阵列dfr A1-cat B2-sat2-aad A1。（2）以筛选到的典型Ⅱ型整合子int I2*-dfr A1-sat2-aad A1序列为模板,利用基因重组技术构建含不同整合酶、不同Pc启动子和不同基因盒的Ⅱ型整合子大肠杆菌试验菌株13株,进行药敏验证,结果显示试验菌株的耐药基因盒均表达了对应的抗生素耐药性。（3）细菌体外竞争试验和流式细胞术分析可得,Ⅱ型整合子结构成本随着整合酶催化活性的增强而增加;同时,其结构成本随着Pc启动子增强而增加,其中启动子Pc2A的适应性代价比Pc2B稍大;此外,Ⅱ型整合子结构成本随着阵列中耐药基因盒数量的增加而增加,单个耐药基因盒的适应性代价均较小;最后,抗生素亚抑制浓度有利于携带典型Ⅱ型整合子大肠杆菌的维持和富集,以有效应对外界抗生素压力,从而促进整合子在细菌间的固定和传播。本课题的完成为进一步揭示整合子介导的耐药基因水平传播机制奠定研究基础,为食源性致病菌耐药性的风险评估和防控技术提供理论依据。