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随着中国畜牧业的发展,禽类养殖业也呈现出发展迅猛的态势。与此同时,鹅养殖业作为中国禽类养殖业的重要组成部分,也得到了飞速发展。其中,鹅羽绒作为一种特殊的鹅副产品,不仅是一种优质的纺织原料,而且还是一种用途广泛的加工产品,蕴含巨大的经济价值。毛囊的发生发育是整个羽绒形成的基础,直接决定羽绒的发生发育及形态品质。因此,我们可以从研究毛囊的发生机理入手以便更好的解决及提高羽绒的产量和质量。目前已有研究表明,Wnt信号通路在参与调控毛囊的发生及不同阶段发育状态中起到十分重要的作用。本试验通过使用生后期不同日龄的卡洛斯鹅和籽鹅的皮肤毛囊为研究对象。使用荧光定量PCR技术检测分析FZD4基因和WNT6基因在卡洛斯鹅和籽鹅皮肤毛囊中的mRNA差异性表达水平;使用WesternBlot技术检测分析FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅皮肤毛囊中的蛋白表达水平;使用IHC技术检测分析FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅皮肤毛囊中的表达定位分布水平,从而为提高鹅的毛囊发育和相关产绒性能的提升奠定理论和实验参考基础。具体研究结果如下:
1、FZD4基因和WNT6基因在鹅生后期皮肤毛囊中mRNA水平的表达分析研究
利用qPCR技术分别检测卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的FZD4基因和WNT6基因的mRNA表达水平并研究其表达规律。结果表明:FZD4基因在鹅皮肤毛囊的各个生长发育阶段均有表达且表达量有较大差别。FZD4基因在卡洛斯鹅皮肤中D18时相对表达量最高,与其他日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D68中相对表达量最低,与D18和D108相比,差异极显著(P<0.01),与其它日龄相比,差异不显著(P>0.05)。在籽鹅皮肤中,D108时相对表达量最高,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D88时表达量相对最低,与D18和D35相比差异不显著(P>0.05),与其它日龄相比,差异显著(P<0.05);WNT6基因在鹅皮肤毛囊的各个生长发育阶段均有表达且表达量有较大差别。在卡洛斯鹅中,WNT6基因在D18中相对表达量最高,与其它日龄相比,差异显著(P<0.05),D88相对表达量最低,与D35、D48、D68相比,差异不显著(P>0.05)。在籽鹅中,WNT6基因在D108中相对表达量最高,与其它日龄相比,差异显著(P<0.05),D88中相对表达量最低。
2、FZD4在鹅生后期皮肤毛囊中蛋白质水平的表达分析研究
利用WesternBlot技术检测分析了FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的蛋白表达水平。结果表明,FZD4蛋白在卡洛斯鹅和籽鹅生后期皮肤毛囊中均有表达。FZD4蛋白在卡洛斯鹅皮肤中D18时表达量最高,与其他日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D68时表达量最低,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01)。在籽鹅皮肤中,D48时表达量最高,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D88中表达量相对最低,与D18相比差异不显著(P>0.05),与其它日龄相比差异显著(P<0.05)。
3、FZD4在在鹅生后期皮肤毛囊中的定位表达分析研究
利用IHC技术检测分析FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的表达定位情况。结果表明,在两个不同品种鹅中,D18时,阳性表达位点均都主要集中在毛球(B),尤其是毛母质(M)部分,还有部分集中在毛囊上段外根鞘;D35-D68时,开始向外根鞘(ORS)转移;D88时,阳性表达位点则均都主要集中在毛球(B),尤其是毛母质(M)部分和外根鞘(ORS);D108时,卡洛斯鹅皮肤毛囊的FZD4基因阳性表达位点主要分布在毛母质(M),籽鹅则仍然分布在毛球(B)部分,尤其是毛母质(M)部分和外根鞘(ORS)。整体来看,两个品种鹅从D18-D88,阳性表达位点逐渐从毛囊上段外根鞘向毛球(B)和外根鞘(ORS)转移。
1、FZD4基因和WNT6基因在鹅生后期皮肤毛囊中mRNA水平的表达分析研究
利用qPCR技术分别检测卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的FZD4基因和WNT6基因的mRNA表达水平并研究其表达规律。结果表明:FZD4基因在鹅皮肤毛囊的各个生长发育阶段均有表达且表达量有较大差别。FZD4基因在卡洛斯鹅皮肤中D18时相对表达量最高,与其他日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D68中相对表达量最低,与D18和D108相比,差异极显著(P<0.01),与其它日龄相比,差异不显著(P>0.05)。在籽鹅皮肤中,D108时相对表达量最高,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D88时表达量相对最低,与D18和D35相比差异不显著(P>0.05),与其它日龄相比,差异显著(P<0.05);WNT6基因在鹅皮肤毛囊的各个生长发育阶段均有表达且表达量有较大差别。在卡洛斯鹅中,WNT6基因在D18中相对表达量最高,与其它日龄相比,差异显著(P<0.05),D88相对表达量最低,与D35、D48、D68相比,差异不显著(P>0.05)。在籽鹅中,WNT6基因在D108中相对表达量最高,与其它日龄相比,差异显著(P<0.05),D88中相对表达量最低。
2、FZD4在鹅生后期皮肤毛囊中蛋白质水平的表达分析研究
利用WesternBlot技术检测分析了FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的蛋白表达水平。结果表明,FZD4蛋白在卡洛斯鹅和籽鹅生后期皮肤毛囊中均有表达。FZD4蛋白在卡洛斯鹅皮肤中D18时表达量最高,与其他日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D68时表达量最低,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01)。在籽鹅皮肤中,D48时表达量最高,与其它日龄相比,差异极显著(P<0.01),在D88中表达量相对最低,与D18相比差异不显著(P>0.05),与其它日龄相比差异显著(P<0.05)。
3、FZD4在在鹅生后期皮肤毛囊中的定位表达分析研究
利用IHC技术检测分析FZD4在卡洛斯鹅和籽鹅生后期18、35、48、68、88和108日龄皮肤毛囊中的表达定位情况。结果表明,在两个不同品种鹅中,D18时,阳性表达位点均都主要集中在毛球(B),尤其是毛母质(M)部分,还有部分集中在毛囊上段外根鞘;D35-D68时,开始向外根鞘(ORS)转移;D88时,阳性表达位点则均都主要集中在毛球(B),尤其是毛母质(M)部分和外根鞘(ORS);D108时,卡洛斯鹅皮肤毛囊的FZD4基因阳性表达位点主要分布在毛母质(M),籽鹅则仍然分布在毛球(B)部分,尤其是毛母质(M)部分和外根鞘(ORS)。整体来看,两个品种鹅从D18-D88,阳性表达位点逐渐从毛囊上段外根鞘向毛球(B)和外根鞘(ORS)转移。