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小麦叶锈病是一种世界性病害,严重威胁小麦生产。迄今为止,所克隆的抗病基因中关于小麦抗叶锈病基因的成功报道较少。目前世界上还没有对小麦Lr38单基因系具有毒性小麦叶锈菌株,其致病型最高为2。本文应用Lr38和致病型分别为0和2的99-8-9-2-1(0)及99-5-30-2(2)两个叶锈菌菌株为材料,应用差异显示技术,分离叶锈菌与小麦互作反应中诱导表达的mRNA,并将所得mRNA反转录成cDNA。然后进行PCR扩增比较不同处理间出现的差异表达的cDNA片段并对其进行进一步分析,取得了一定的进展。 小麦叶锈菌(Puccinia recondita f.sp.tritici)两个菌株99-8-9-2-1(0)及99-5-30-2(2)分别接种含Lr38的单基因系材料,组成强不亲和及弱不亲和互作组合,应用差异显示RT-PCR技术,使用分别带有HindⅢ酶切位点的3个锚定引物AAGCT10N(N为A、G或者C),与24条10mer随机引物组合,分析以上处理和不接菌对照处理的mRNA表达水平的差异。发现不同引物组合间扩增结果差别较大,且不同引物组合扩增产物间多态性也不同。 对接种后12,24,36,48,60和72h的小麦样品分别取样,提取叶片组织总RNA以代替mRNA进行分析,结果发现在24h即有差异条带出现,但数量很少。在36h出现差异条带明显增多,表现出病原物与寄主植物互作而诱导寄主组织抗病基因的表达。将获得的差异条带回收,并在对应的基本相同条件下扩增以便进行后继工作如Northern杂交检测、cDNA文库构建、克隆、测序等。