【摘 要】
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本文利用PCR筛库法结合5’RACE法和3’RACE法,成功地从4龄斜带石斑鱼的卵巢cDNA文库中筛选出一种SRY相似基因,全长为2253bp,编码一个389个氨基酸的多肽,命名为Sox11b。氨基酸序列
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本文利用PCR筛库法结合5’RACE法和3’RACE法,成功地从4龄斜带石斑鱼的卵巢cDNA文库中筛选出一种SRY相似基因,全长为2253bp,编码一个389个氨基酸的多肽,命名为Sox11b。氨基酸序列分析表明它的HMG区域同其它Sox11蛋白的HMG区域相差1~2个氨基酸,属于Sox蛋白家族的C亚族成员中的Sox11蛋白;进化树分析完整蛋白表明,它与所有鱼类Sox11蛋白处于同一簇,与斑马鱼Sox11b蛋白以及虹鳟鱼Sox24蛋白处于同一分支。Sox11b为单拷贝基因。该基因在卵巢的mRNA全长为2.3kb。
一步法RT-PCR结合Southern杂交表明:Sox11b除了血液未检测到表达外,其它所有组织都有广泛表达;在卵巢有非常高的表达量;在嗅球、前脑、后脑、下丘脑、延脑、垂体、鳃、心脏、肝脏、肌肉能检测到表达;在中脑、肾脏、脾脏、脂肪能检测到低的表达量;在胚胎和仔鱼发育过程中,一直都有表达,且在受精卵和胚胎发育早期有较高的表达量,但在晶体期、孵化后5天、18天、33天都有出现表达量降低的现象。Northern杂交表明:在脂肪未检测到表达;在全脑组织、脾脏可见非常低的表达;在4龄鱼卵巢、2龄鱼卵巢都能检测到非常高的表达量,且4龄鱼卵巢Sox11bmRNA的表达量高于2龄鱼卵巢。对自然性逆转过程的鱼的性腺,进行Northern杂交和RT-PCR分析都表明,卵巢发育越好的鱼,Sox11bmRNA的表达量越高,随着性转变为精巢,Sox11bmRNA表达量降低。对MT人工诱导性逆转鱼的性腺,进行RT-PCR分析表明,在MT处理40天和60天,Sox11bmRNA的表达量显著降低。而AI人工诱导性逆转的性腺,Sox11bmRNA的表达量并无显著性变化。通过这些结果我们认为Sox11b在卵巢和胚胎发育起着重要的作用。
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