【摘 要】
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鲫鱼PKP基因(CaPKR-like)是鱼类第一个、也是非哺乳类脊椎动物第一个报道的PKR同源物。该基因编码的蛋白 N-端没有典型的dsRBM区域，取而代之的是两个 Z-DNA 结合区域(Zαl和Z
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鲫鱼PKP基因(CaPKR-like)是鱼类第一个、也是非哺乳类脊椎动物第一个报道的PKR同源物。该基因编码的蛋白 N-端没有典型的dsRBM区域，取而代之的是两个 Z-DNA 结合区域(Zαl和Zα2)。所以，CaPKR-like 是 Zα蛋白家族成员。CaPKR-like 可能同时具有哺乳动物类干扰素系统中两种重要效应蛋白ADAR1和PKR结构特征。故而对Zα结构的研究有助于丰富对鱼类细胞的抗病毒免疫反应过程和机制的认识。
本文在前期工作基础上，将从SMART-cDNA文库中克隆得到的 CaPKR-likeZαl、Zα2 及 ZαlZα2结构域cDNA重组至载体中，原核表达三种融合多肽(P<,Zαl>、P<,Zα2>及P<,Zα1Zα2>)。亲和层析纯化表达产物，得到Zα<,PKR-like>。凝胶阻滞实验分析表达Zα<,PKR-like>与Poly I:C、鲑精DNA、重组质粒d(CG)<,13>、d(CG)<,13>的亲和性。结果表明，P<,Zα1>、P<,Zα2>及二者的混合物均不能与双链RNA(Poly I:C)和鲑精DNA及d(CG)<,13>结合。而P<,Zα1Zα2>与Poly I:C和鲑精DNA及d(CG)<,13>有明显的结合，而且随P<,Zα1Zα2>浓度的增加，Poly I:C、鲑精DNA、重组质粒d(CG)<,13>和a(CG)<,13>在琼脂糖凝胶电泳中的阻滞作用越明显。
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