【摘 要】
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抗菌肽对许多致病菌，如致病型大肠杆菌、伤寒杆菌、硝酸盐杆菌等有抗菌作用。而且,部分抗菌肽对一些临床耐药致病菌也有良好的抗菌作用。人类真菌病害在目前仍是一个难以解决
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抗菌肽对许多致病菌，如致病型大肠杆菌、伤寒杆菌、硝酸盐杆菌等有抗菌作用。而且,部分抗菌肽对一些临床耐药致病菌也有良好的抗菌作用。人类真菌病害在目前仍是一个难以解决的问题。抗真菌肽的发现，无疑为该类病害的治疗提供了新的思路。传统抗生素的毒副作用及其耐药菌株的出现，迫使人们去寻找新型的抗微生物制剂。研究发现防御素(defensin)和天蚕素(cecropin)能够快速的杀死广谱病原微生物，且作用机理特殊，相对地不具有免疫原性，展示了其在应用方面的广阔前景。
本研究根据GeneBank中提交的序列，以果蝇总DNA和总RNA为模板，利用PCR和RT-PCR技术，扩增出两端加入了连接接头的防御素(defensin)及天蚕素B(cecropinB)基因，将接头处理成粘性末端，可以与经过CpoⅠ及NotⅠ酶切后的pHBM905B表达载体正确连接。将defensin基因和cecropinB基因与分泌型酵母表达载体pHBM905B重组，构建重组酵母表达载体pHBM905B/defensin和pHBM905B/cecropinB，经“三明治”夹心平板筛选及菌落PCR鉴定证明目的基因已整合入酵母染色体中。挑选阳性克隆用甲醇诱导其表达，以SDS-PAGE分析表达产物，表达蛋白的相对分子量约为14KD，证明与糖基化后预期分子量大小一致。用琼脂糖扩散法检测上清液的生物学活性，观察到产生了明显的抑菌圈，显示其具有较强的抗菌活性，并且表达产物有极强的热稳定性，同时在高盐的环境下仍能发挥抗菌活性，展示了诱人的应用前景，为以后进一步的药学分析研究及工业批量生产奠定了基础。
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