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目的:利用生物素亲和素系统,将阳离子纳米脂质体连接在脂质微泡表面,制备一种新型基因微泡载体。方法:1、将一定摩尔比的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)与生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(Bio-PEG-DSPE)置于甘油及PBS混悬液中,并加入微量异硫氰酸荧光素(FITC),充分混匀后,采用机械振荡法,制备生物素化脂质微泡(Bio-LMB)。同时,用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)取代Bio-PEG-DSPE,采用相同方法制备非生物素化脂质微泡(LMB)作为对照。2、取一定摩尔比的氢化大豆卵磷脂(HSPC)、3β-[N-(N′,N′-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)、Bio-PEG-DSPE溶于适量氯仿,并加入微量罗丹明6G,充分溶解后,采用薄膜分散-膜挤压法,制备生物素化阳离子纳米脂质体(Bio-CNLP)。同时,取相同比例的HSPC与DC-Chol,采用相同方法制备非生物素化阳离子纳米脂质体(CNLP)作为对照。3、将Bio-LMB与过量的亲和素4℃孵育30 min,静置后抽吸下层过量亲和素,同时加入过量Bio-CNLP,4℃继续孵育30 min。相同方法连接LMB与CNLP作为对照组。4、取漂浮在上层的乳液,行激光共聚焦显微镜观察实验组与对照组的连接效果。结果:激光共聚焦显微镜下Bio-LMB + Bio-CNLP组可见绿色Bio-LMB壁因连接Bio-CNLP而不光滑,周围可见数量不等的红色小圆形点状Bio-CNLP呈花环状聚集,而LMB + CNLP组LMB壁光滑,周围未见CNLP聚集。结论:采用生物素亲和素连接系统,可将Bio-CNLP牢固连接于Bio-LMB表面,为探索新型基因微泡载体提供一种新思路,有望为肿瘤靶向基因治疗提供一种新方法。第二部分脂质微泡-PLGA纳米微球复合体制备的实验研究目的:采用碳二亚胺法,将PLGA纳米微球连接在脂质微泡表面,制备一种新型药物微泡载体。方法:1、将一定摩尔比的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、氨基化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NH2-PEG-DSPE)置于甘油及PBS溶液的混悬液中,充分混匀后,采用机械振荡法制备表面带氨基脂质微泡(NH2-LMB)。2、采用双乳化法制备普通乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微球(NP)。3、取部分NP,采用碳二亚胺法活化其表面的羧基得到活化的PLGA纳米微球(NP-COOR)。4、分别将过量NP与NP-COOR加入两管等量NH2-LMB中,4℃孵育,12、24、36、48 h后,取上层漂浮的乳液,在光镜下观察连接效果。结果:12、24 h后,在光镜下两管微泡周围都未见纳米微球聚集。36 h后,NP + NH2-LMB组脂质微泡周围未见纳米微球的聚集; NP-COOR + NH2-LMB组部分脂质微泡周围可见少量纳米微球聚集。48 h后,光镜下NP + NH2-LMB组脂质微泡表面光滑,周围未见纳米微球的聚集;NP-COOR + NH2-LMB组脂质微泡表面不光滑,周围布满数量不等的小圆形的纳米微球,呈花环状。结论:采用碳二亚胺法,可将PLGA纳米微球成功连接于脂质微泡表面,为探索一种新型药物微泡载体提供一种新思路,有望为肿瘤靶向药物治疗提供一种新途径。