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癫痫是神经系统最常见的疾病之一,以反复的自发发作为特征,还伴随认知,心理以及社会的影响。癫痫发生是指各种伤害性脑损伤,(如外伤、中风、癫痫持续状态、颅内感染等)诱导脑内级联事件的发生,最后导致癫痫易感性增高,并出现癫痫自发性发作的过程。目前癫痫的治疗仍以药物治疗为主。虽然有各种类型的抗癫痫药,但仍有约30%的患者对药物治疗不敏感,而且,目前的这些药物主要是症状性的,即针对癫痫发作的症状,不针对导致癫痫发生的病理环节和进程。所以,我们仍迫切需要寻找治疗癫痫的新的疗法。我们前期的实验研究表明,SE后齿状回内大量新生的神经元出现向门区的异常迁移,而且小胶质细胞激活在异常迁移中起很大作用。应用小胶质细胞特异性的阻断剂米诺环素可阻止癫痫发作导致的新生神经元异常迁移。近年来,药用植物药的研究是一个热点。黄芩苷是从传统中药黄芩中提取的重要单体,它可透过血脑屏障,通过抗炎、抗凋亡等发挥神经保护作用,可有效保护脑缺血等损伤。既往研究表明有抗炎、抗氧化、抗凋亡及神经保护作用,也有研究表明它可以作用于GABAA受体苯二氮卓类位点,有抗抑郁作用,那么它对于癫痫有无保护作用呢?基于以上假设:我们做了以下实验:本研究建立化学诱导的大鼠癫痫模型,观察黄芩苷的抗癫痫发生及神经保护作用,而且我们观察了黄芩苷对于神经干细胞增殖及分化的影响。期望通过本研究的完成,为癫痫的防治提供新的思路与靶点。1.黄芩苷对匹罗卡品诱导的癫痫模型大鼠的抗惊厥与神经保护作用研究我们采用匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型,我们给予黄芩苷100mg/kg或者生理盐水腹腔注射预处理,30分钟后给予大鼠腹腔注射400mg/kg匹罗卡品建立化学致癫模型,并于SE后24小时,36小时分别行生物学及免疫组织化学检测,观察黄芩苷对大鼠行为学,海马的氧化应激指标改变,以及海马神经元坏死、变性及凋亡的影响。实验结果如下:1)黄芩苷可明显降低大鼠SE发生率,延长SE发作潜伏期,降低死亡率。2)黄芩苷对癫痫发作导致的氧化应激改变有一定的保护作用3)黄芩苷对SE导致的神经元坏死、变性有一定保护作用,可抗凋亡,其抗凋亡机制可能与抑制caspase-3通路有关。2.黄芩苷抗癫痫发生及改善癫痫后认知功能障碍的实验研究在前期实验基础上,接下来我们观察了黄芩苷是否具有抗癫痫发生的作用。我们采用采用锂-匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型,分别在注射氯化锂及匹罗卡品前1小时给予黄芩苷100mg/kg或者生理盐水腹腔注射。SE形成后,动物腹腔注射黄芩苷或等量的生理盐水连续14天或直至动物处死。SE后3天采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性因子IL-1β和TNF-α,于SE后7天行FJB染色观察海马细胞变性,在SE后7天行免疫组化染色观察小胶质细胞和星形胶质细胞的激活。SE后14d-28d采用视频监测观察各组大鼠癫痫自发发作。并在SE后31-36天行Morris水迷宫测试,观察黄芩苷对大鼠癫痫发作后认知功能的影响。在SE后5周后(水迷宫检测后)采用Timm染色评估黄芩苷对癫痫发作后苔藓纤维芽生的影响。实验结果如下:1)黄芩苷可抑制SE后急性期炎性因子的释放。2)黄芩苷抑制SE后7天小胶质细胞和星形胶质细胞的激活。3)黄芩苷对SE导致的神经元变性有保护作用。4)黄芩苷对SE后大鼠自发发作有改善作用。5)黄芩苷对SE后大鼠认知功能障碍有保护作用。6)黄芩苷可抑制SE导致的苔藓纤维芽生。3黄芩苷对神经干细胞增殖及分化的影响我们取孕龄14.5d的SD大鼠的大脑(皮层或后侧神经节隆起)进行神经干细胞培养,并取P2代神经干细胞,观察黄芩苷对于神经干细胞增殖及分化的影响。实验结果如下:1)黄芩苷可促进神经干细胞的增殖。2)黄芩苷可诱导神经干细胞向神经元分化,抑制神经干细胞向胶质细胞分化。3)黄芩苷可诱导神经干细胞向GABA能神经元分化。4)黄芩苷诱导神经干细胞定向分化的机制有可能与促进Mash1表达上调有关。进一步机制值得探讨。